Проксимальная культуральная система: метод культивирования in vitro для изучения паракринной передачи сигналов между клетками

Аннотация

Источник: Dasari, S. et al. метод проксимального культивирования для изучения паракринной передачи сигналов между клетками.J. Vis. Exp. (2018)

В этом видео мы разрабатываем проксимальную ко-культуральную модель клеток рака яичников и первичных мезотелиальных клеток человека. Эта физиологически значимая модель позволяет изучать паракринную сигнализацию, при которой локализованные концентрации секретируемых факторов сохраняются, предотвращая прямой клеточный контакт.

Протокол

A. Подготовка клеток

1. Выделение и культивирование первичных мезотелиальных клеток человека
   1. Выделите первичные мезотелиальные клетки человека (ГПМЦ) из сальника человека и вырастите их в полной питательной среде [Модифицированная орлиная среда Дульбекко (DMEM), содержащая 10% эмбриональной бычьей сыворотки, 1% пенициллин-стрептомицина, 1% заменимых аминокислот и 1% витаминов] при 37 °C и 5% CO₂,
      заметка: ГПМЦ обычно выращивают до 100% слияния (Рисунок 1A).
2. Условия роста клеток рака яичников
   1. Выращивание клеток ....

Результаты

Рисунок 1: Сборка проксимальной системы культуры.(A) На этой панели показаны первичные мезотелиальные клетки человека (ГПМЦ). (B) На этой панели показаны клетки рака яичников HeyA8. Масштабные линейки = 200 μм (А-В). (C) Клетки HeyA8 засеивали на нижнюю поверхность трансвелловой вставки с порами 0,4 мкм. После того, как клетки были пр.......

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Проницаемая опора Transwell 24 мм со вставкой из поликарбонатной мембраны 0,4 мкм	Corning (Costar)	No 3412	• Полупрозрачная поликарбонатная мембрана толщиной 10 мкм. • Обработано для оптимального прикрепления клеток. • Упаковано по 6 вкладышей в 6-луночный планшет, по 4 пластины в ящике><. • Мембрана должна быть окрашена для видимости клеток. • Стерилизуется гамма-излучением.
6-луночная пластина	Corning (Сокол)	353046	Плоское дно, обработанное TC, стерильное, с крышкой
Блюдо для культуры 15 см	Corning (Сокол)	353025	Стерильная чашка для клеточных культур, обработанная ТС
DMEM	Corning (Cellgro)	10-013-СВ
Пенициллин стрептомицин	Корнинг	30-002-КИ
Заменимые аминокислоты MEM	Corning (Cellgro)	25-025-КИ
Пипец			Подойдет любая марка
CO2-инкубатор			Подойдет любая марка
Шкаф биобезопасности уровня II			Подойдет любая марка