Внутрибрюшинное введение клеток: метод доставки раковых клеток в брюшинную жировую ткань мышиной модели

Аннотация

Источник: Krishnan, V. et al. Подходы к изучению метастатической колонизации молочных пятнистых структур при раке яичников в брюшинном жировом ожирении. J. Vis. Exp. (2015)

В этом видео мы выполняем внутрибрюшинную инъекцию суспензии клеток рака яичников в мышиной модели, чтобы изучить колонизацию клеток рака яичников в брюшинных жировых тканях и их последующее метастазирование.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были рассмотрены местным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Внутрибрюшинное введение клеток

ПРИМЕЧАНИЕ: В наших экспериментах мыши обрабатываются в ламинарном потоке воздуха или шкафу биобезопасности в нашем барьерном центре, чтобы ограничить риск воздействия патогенов. Чтобы наглядно продемонстрировать эту технику, процедуры, описанные в сопроводительном видео, были проведены в лаборатории, одобренной для работы с животными. Эта конкретная техника не требует анестезии у животных. По утвержденным протоколам выполняют эту методику на живых животных. Для этого исследования используйте соответствующие линии мышей. Например: использовать иммунокомпрометированных, атимических обнаженных мышей для изучения колонизации клеток рака яичников человека (SKOV3ip.1 и HeyA8); использовать иммунокомпетентных мышей C57BL/6 для изучения колонизации клеток рака яичников (ID8) мышей.

1. Загрузите в шприц 500 μл одноклеточной суспензии клеток рака яичников и вставьте в стерильную иглу с колпачком 25 G. Это уменьшает сдвиг клеток перед инъекцией.
2. Возьмите мышь за загривок и удерживайте хвост ладонью и указательным пальцем и зафиксируйте левую заднюю ногу между безымянным и мизинцем (когда мышь удерживается левой рукой).
   ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы избежать травмирования органов брюшной полости, хорошо удерживайте мышь, чтобы она не могла двигаться во время инъекции.
3. Представьте себе линию на животе чуть выше колен и найдите точку с правой стороны животного и близко к средней линии. Точка входа находится краниально и немного медиально от последнего соска.
   заметка: Введение иглы с правой стороны мыши позволяет избежать слепой кишки и снижает риск прокола кишечника.
4. Введите иглу в нижнюю боковую область брюшка мыши на глубину примерно 0,5 см. Потяните за поршень, чтобы подтвердить, что игла не проникла в кровеносный сосуд или другие органы брюшины.
   1. Если какая-либо жидкость была аспирирована, выбросьте шприц (и образец). Зеленовато-коричневый или желтый аспират указывает на проникновение иглы в кишечник или мочевой пузырь соответственно.
5. Вводите образец с помощью медленного, постоянного давления. Извлеките иглу и верните мышь в клетку. Не закрывайте шприц крышкой перед утилизацией в острую емкость.
6. Принесите мышей в жертву с помощью асфиксии CO₂ и удаления жизненно важных органов в определенный момент времени после инъекции.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
DMEM	Корнинг	10-013-СВ
ПБС	Корнинг	21-040-ЧВ	Без кальция и магния
Игла 26 калибра	БД	329652