Заготовка перитонеального жирового депо: метод изучения колонизации брюшинных жировых тканей раком яичников на мышиных моделях

Аннотация

Источник: Krishnan, V. et al. In vivo и ex vivo подходы к изучению метастатической колонизации рака яичников структурами молочных пятен в брюшинном жировом отложении. J. Vis. Exp. (2015)

В этом видео мы используем модель мыши женского пола с раком яичников. Затем мы описываем протокол идентификации и извлечения жировых депо или жировых тканей, связанных с пятью основными органами брюшины, для изучения метастатической колонизации раковыми клетками.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Подготовка животных к экспериментальным исследованиям

1. Позволить животным акклиматизироваться к новому содержанию и окружающей среде, восстановиться после возможных физиологических последствий транспортировки и обращения.
   заметка: Следующая методика применима ко всем коммерчески доступным штаммам мышей. Количество животных, которые будут использоваться для эксперимента, зависит от плана исследования и должно проводиться после консультации со статистиком.

2. Идентификация и выделение брюшинных жировых депо

1. Усыпляйте животных с помощью передозировки CO₂ и вторичного физического метода для подтверждения смерти.
2. Поскольку забор перитонеальных жировых депо представляет собой удаление внутренних органов (вторичный метод), сделайте разрез по средней линии рядом с паховыми сосочками через стенку брюшины, чтобы обнажить внутренние органы (Рисунок 1A).
3. Для сальникового жира (ОМ) обнажите комплекс сальник/поджелудочная железа, вытянув селезенку из брюшной полости с помощью щипцов (рис. 1C). Освободите сальник от поджелудочной железы и селезенки, плотно обрезав все тканевые соединения. Убедитесь, что вся оставшаяся ткань поджелудочной железы иссечена.
4. Для удаления гонадного жира (GF) используйте щипцы для поднятия гонадного жира, окружающего яичники, и иссекайте его, разрезая тканевые соединения (Рисунок 1A вверху справа).
5. Для удаления маточного жира (МЗ) с помощью щипцов подтяните маточный жир, окружающий маточные рога, и иссекайте его путем разрезания тканевых соединений (Рисунок 1A внизу справа).
6. Для брыжеечного жира (МФ) разрежьте соединение между тонкой кишкой и привратником. С помощью щипцов крепко обхватите свободный конец тонкой кишки, и медленно «отслаивайте» его от брыжеечного жира. Освободите брыжеечный жир от корня брыжейки с помощью препарирующих ножниц (рисунок 1A внизу слева).
7. Для спленопортального жира (SF) приподнимите дистальный конец селезенки с помощью щипцов, чтобы обнажить тонкую жировую полосу ткани, соединяющую ворота селезенки с поджелудочной железой. Удалите спленопортальный жир, сначала освободив его от поджелудочной железы, а затем осторожно отделив от селезенки (рисунок 1В).

Результаты

Рисунок 1. Взаимное расположение и структура основных брюшинных жировых депо. (А)Грубая анатомическая диссекция, показывающая относительное расположение четырех из пяти основных источников перитонеального жира. Показан сальник (ОМ; обведен контуром), гонадный жир (ГФ), маточный жир (МВ), брыжейка (MY), яичник (ов), маточные рога (УХ) и тонкий кишечник (си). (В) Сплено...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Инструменты для препарирования	Инструменты для точной науки	NA
ПБС	Корнинг	21-040-ЧВ	Без кальция и магния