$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными, были рассмотрены местным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.
1. Вскрытие мочеполовой системы (UGS)
ПРИМЕЧАНИЕ: Схема представлена на рисунке 1.
- Усыпить 3-месячного самца мыши C57BL/6 с помощью метода ингаляционной эвтаназии CO2 или другого одобренного метода><.
заметка: Мыши в возрасте от 3 до 12 месяцев могут быть успешно использованы для эксперимента. У более старых мышей (> 6 месяцев), скорее всего, будет больше жира вокруг UGS, который нужно будет очистить. Идентификация и разделение долей часто затруднены у мышей младше 3 месяцев. Для эксперимента можно использовать и другие штаммы.
- Положите мышь на спину и закрепите ноги с помощью булавок так, чтобы была обнажена брюшная сторона животного.
- Распылите 70% этанол на брюшную полость мыши и протрите его.
заметка: Бритье волос на животе перед вскрытием не требуется.
- Подтяните кожу с живота вместе с мышечным слоем с помощью пары средних тупых щипцов и сделайте перевернутый Y-образный разрез на животе с помощью ножниц.
- Сначала сделайте прямой разрез острыми ножницами чуть выше пениса до грудины (рисунок 2а).
- Разрежьте от основания разреза к каждому пальцу ноги, до бедер (Рисунок 2b). Отогните кожу с обеих сторон и внизу, чтобы увидеть всю область живота (Рисунок 2c-e).
заметка: Размер разреза варьируется в зависимости от возраста и размера мыши. Размер начального прямого разреза может составлять от 1,5 до 4 см, в зависимости от размера мыши.
- Переместитесь на другие органы, чтобы обнажить UGS. Поднимите и двигайте коричнево-желтые кишки (Рисунок 2f). Подхватите щипцами жировые пакеты живота (непрозрачную белую губчатую ткань) и сдвиньте их в стороны (Рисунок 2г).
заметка: UGS состоит из семенных пузырьков, уретры, предстательной железы, семявыносящих протоков (семявыносящих протоков) и мочевого пузыря. Его можно определить по характерной паре непрозрачных белых полукруглых дуг (которые являются семенными пузырьками) с заполненным жидкостью пузырчатым мешком, прикрепленным к основанию. Полупрозрачной тканью, расположенной прямо под семенными пузырьками, является простата.
- Найдите UGS, крепко удерживайте мочевой пузырь тупыми щипцами и поднимите весь UGS вверх от брюшной полости мыши.
заметка: Если мочевой пузырь полон, сначала слейте воду с помощью небольшого шприца, чтобы обеспечить лучший захват щипцами и снизить риск разрыва мочевого пузыря.
- Продолжая подтягивать мочевой пузырь, проведите ножницами под мочевой пузырь и простату до самого позвоночника и сделайте надрез. Разрежьте все оставшиеся соединения брюшной полости (Рисунок 2h и 2i). Будьте осторожны и не режьте слишком близко к UGS, чтобы избежать случайного разреза тканей предстательной железы.
заметка: При выполнении разреза под UGS ножницы должны быть вставлены до самой задней части мыши, чтобы разрез также ломал позвоночный столб. Этот метод приводит к разрыву почти всех связей между UGS и брюшной полостью за один раз, что сокращает время, необходимое для извлечения ткани из мыши.
- Извлеките UGS и поместите его в 2-6 мл (достаточно, чтобы покрыть ткань) фосфатно-солевого буфера (PBS) или модифицированной средой Dulbecco Eagle (DMEM, высокий уровень глюкозы) в чашке Петри диаметром 6 см (рис. 2j и 2k) и переместите ее в диссекционный микроскоп (10-кратное увеличение).
заметка: Измените рассекающий носитель в соответствии с требованиями на оставшихся шагах.
