Извлечение простаты из мочеполовой системы мыши: метод отделения предстательной железы от других органов мочевыделительной и половой системы у самцов мышей

Все процедуры, связанные с животными, были рассмотрены местным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Вскрытие мочеполовой системы (UGS)

ПРИМЕЧАНИЕ: Схема представлена на рисунке 1.

1. Усыпить 3-месячного самца мыши C57BL/6 с помощью метода ингаляционной эвтаназии CO₂ или другого одобренного метода><. заметка: Мыши в возрасте от 3 до 12 месяцев могут быть успешно использованы для эксперимента. У более старых мышей (> 6 месяцев), скорее всего, будет больше жира вокруг UGS, который нужно будет очистить. Идентификация и разделение долей часто затруднены у мышей младше 3 месяцев. Для эксперимента можно использовать и другие штаммы.
2. Положите мышь на спину и закрепите ноги с помощью булавок так, чтобы была обнажена брюшная сторона животного.
3. Распылите 70% этанол на брюшную полость мыши и протрите его.
   заметка: Бритье волос на животе перед вскрытием не требуется.
4. Подтяните кожу с живота вместе с мышечным слоем с помощью пары средних тупых щипцов и сделайте перевернутый Y-образный разрез на животе с помощью ножниц.
   1. Сначала сделайте прямой разрез острыми ножницами чуть выше пениса до грудины (рисунок 2а).
   2. Разрежьте от основания разреза к каждому пальцу ноги, до бедер (Рисунок 2b). Отогните кожу с обеих сторон и внизу, чтобы увидеть всю область живота (Рисунок 2c-e).
      заметка: Размер разреза варьируется в зависимости от возраста и размера мыши. Размер начального прямого разреза может составлять от 1,5 до 4 см, в зависимости от размера мыши.
5. Переместитесь на другие органы, чтобы обнажить UGS. Поднимите и двигайте коричнево-желтые кишки (Рисунок 2f). Подхватите щипцами жировые пакеты живота (непрозрачную белую губчатую ткань) и сдвиньте их в стороны (Рисунок 2г).
   заметка: UGS состоит из семенных пузырьков, уретры, предстательной железы, семявыносящих протоков (семявыносящих протоков) и мочевого пузыря. Его можно определить по характерной паре непрозрачных белых полукруглых дуг (которые являются семенными пузырьками) с заполненным жидкостью пузырчатым мешком, прикрепленным к основанию. Полупрозрачной тканью, расположенной прямо под семенными пузырьками, является простата.
6. Найдите UGS, крепко удерживайте мочевой пузырь тупыми щипцами и поднимите весь UGS вверх от брюшной полости мыши.
   заметка: Если мочевой пузырь полон, сначала слейте воду с помощью небольшого шприца, чтобы обеспечить лучший захват щипцами и снизить риск разрыва мочевого пузыря.
7. Продолжая подтягивать мочевой пузырь, проведите ножницами под мочевой пузырь и простату до самого позвоночника и сделайте надрез. Разрежьте все оставшиеся соединения брюшной полости (Рисунок 2h и 2i). Будьте осторожны и не режьте слишком близко к UGS, чтобы избежать случайного разреза тканей предстательной железы.
   заметка: При выполнении разреза под UGS ножницы должны быть вставлены до самой задней части мыши, чтобы разрез также ломал позвоночный столб. Этот метод приводит к разрыву почти всех связей между UGS и брюшной полостью за один раз, что сокращает время, необходимое для извлечения ткани из мыши.
8. Извлеките UGS и поместите его в 2-6 мл (достаточно, чтобы покрыть ткань) фосфатно-солевого буфера (PBS) или модифицированной средой Dulbecco Eagle (DMEM, высокий уровень глюкозы) в чашке Петри диаметром 6 см (рис. 2j и 2k) и переместите ее в диссекционный микроскоп (10-кратное увеличение).
   заметка: Измените рассекающий носитель в соответствии с требованиями на оставшихся шагах.

Рисунок 1: Схематическая блок-схема, демонстрирующая вскрытие мочеполовой системы мыши и выделение простаты. Блок-схема для этапов протокола, описанных в разделах 1

Рисунок 2: Вскрытие мышиного UGS. Пошаговые изображения вскрытия UGS у 3-месячной мыши: (a и b) выполнение разрезов, (c-e) оттягивание кожи для обнажения области живота, (f) смещение кишечника, (g) перемещение жировых пакетов живота, (h и i) извлечение UGS из брюшной полости, (j) извлечение UGS, (k) извлеченные UGS с различными органами и тканями, обозначенными следующим образом: SV (желтый) = семенные пузырьки; P (красный) = простата; F (фиолетовый) = жир; V (голубой) = семявыносящий проток; и B (зеленый) = мочевой пузырь.