Забор образцов одиночных клеток с помощью микроманипуляций: метод выделения одиночных клеток из суспензии раковых клеток

Abstract

Источник: Chen S. et al. Предварительное обогащение клеток-мишеней и амплификация всего генома для последующей характеристики одной клетки. J. Vis. Exp. (2018)

В этом видео описывается техника выделения отдельных клеток из пула целевых клеток для проведения последующего анализа. В этом методе используется микроманипулятор, установленный на микроскопе, для высокоточной изоляции одной клетки-мишени.

Protocol

1. Выборка одиночных клеток

1. Микроманипуляции
   ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы обеспечить последующее применение, такое как анализ всего генома (WGA), изолированные одиночные клетки будут добавлены к 2 мкл мастер-смеси для лизиса клеток. Приготовьте мастер-смесь в соответствии с количеством обрабатываемых ячеек. Рассчитайте дополнительные объемы потерь из-за пипетирования и поместите мастер-смесь для лизиса клеток на лед.
   1. Готовим мастер-смесь для лизиса клеток (компоненты набора WGA, Таблицы материалов и реактивов). Вкратце смешайте 2,0 мкл реакционного буфера, 1,3 мкл октилфеноксиэтокс....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Фосфатно-солевой буфер (1x PBS)	Thermo Fisher Scientific	10010-015
Вакуумные трубки ЭДТА (или Na-гепарин)	БД	366450 (или 366480)	Используется в качестве реакционной пробирки для захвата клеток мишеней ex vivo
Пастеровские пипетки 150 мм	Волак	Д810	Используется для малообъемного нанесения ячеек в C&R
Ручка для смазки	Дако	С2002	Используется на стеклянных предметных стеклах для удержания подвеса ячеек на месте
Axiovert M200 с микроманипулятором MMJ и CellTram vario	Zeiss/Eppendorf		Используйте микроманипуляции под рукой
Микрокапилляры (диаметр 25 мкм), CustomTip тип I	Эппендорф	930001201	Используется для микроманипуляций с клетками
0,2 мл ПЦР-пробирок	Биозим	710920