$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. Функциональная характеристика приобретенной резистентности к доцетакселу с помощью анализа на образование колоний
ПРИМЕЧАНИЕ: В этом протоколе химиорезистентность оценивалась с использованием анализов на образование колоний. Альтернативные методы, используемые для оценки жизнеспособности клеток (т.е. анализы MTS), могут быть использованы на основе предпочтений исследователей.
- В планшет помещают 2000 клеток (DU145 или 22Rv1, как родительские, так и устойчивые к доцетакселу) в 6-луночные планшеты, используя 2 мл среды на лунку.
- Через 24 ч добавить возрастающие концентрации доцетаксела (родительские клетки: 0,25, 0,5, 1, 2,5 и 5 нМ; Ячейки DR: 50, 125, 250, 500 и 1000 нМ). Для ячеистых линий DU145 и 22Rv1. Добавляйте ДМСО только в одну лунку в качестве контроля в том же объеме, который используется для самой высокой дозы доцетаксела.
- Через 72 ч аспирировать лекарственную среду и добавить свежую среду, не содержащую доцетаксела.
- Инкубируйте планшеты в течение 1-2 недель, пока колонии не станут видны под микроскопом.
- Чтобы окрасить колонии, осторожно промойте их 2-3 мл PBS и инкубируйте с 2-3 мл кристаллического фиолетового раствора (0,1% мас./об. в 10% формалине) в течение 20 минут внутри вытяжного шкафа или вытяжного шкафа.
- Удалите раствор для окрашивания, вымойте пластины с 2-3 мл H2O, удалите H2O и высушите пластины на воздухе.
- Проанализируйте результат, визуализировав лунки и вручную подсчитав колонии с помощью маркера (чтобы не подсчитывать одни и те же колонии дважды) и представьте процент жизнеспособности клеток на графике. Сделайте цифровые изображения пластин для представления рисунка (рисунок 1A).
