Ксенотрансплантат опухоли почечной капсулы: метод создания экспериментальной модели на животных для оценки канцерогенеза предстательной железы

Аннотация

Источник: Николсон, Т. М. и др. Ксенотрансплантация почечной капсулы и подкожная имплантация гранул для оценки канцерогенеза предстательной железы и доброкачественной гиперплазии предстательной железы. J. Vis. Exp. (2013)

В этом видео мы демонстрируем имплантацию трансплантатов ткани рака простаты человека, в почечную капсулу мыши с ослабленным иммунитетом. Этот метод может быть использован для оценки прогрессирования опухоли и разработки новых терапевтических стратегий.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Хирургическая процедура: ксенотрансплантация почечной капсулы

1. Перед введением анестезии понаблюдайте за мышью, чтобы убедиться в ее здоровье и благополучии.
2. Поместите мышь в камеру для индукции изофлурановой анестезии в концентрации 3-5%. Когда животное перестало двигаться и частота дыхания уменьшилась, переложите на носовой конус в положении лежа, и поддерживайте анестезию на уровне 1-3%.
3. При необходимости используйте машинки для стрижки для бритья задней части мыши. Это не нужно при использовании атимических обнаженных (ню/ню) мышей.
4. Сильно надавите на перепонку вытянутой задней части стопы, чтобы оценить адекватность анестезии. Если мышь реагирует на давление, требуется больше времени, чтобы анестезия подействовала. При необходимости немного отрегулируйте поток анестезии для достижения адекватной анестезии.
5. Когда мышь будет адекватно обезболена, продезинфицируйте место операции хирургическим раствором йода (бетадина) с последующим добавлением 70% спирта.
6. Наденьте стерильные перчатки и халаты, наложите стерильные простыни на операционное место. Подтяните кожу задней части с помощью зубчатых щипцов и с помощью грубых ножниц сделайте разрез по средней линии спины на 2-3 см.
7. С помощью тупых ножниц или зонда отделите подлежащую дерму от стенки тела (с обеих сторон разреза при двусторонней пластике или с одной стороны при односторонней пластике).
8. Переместите мышь в боковое положение и определите расположение почки, просматривая профиль почек через мышечную стенку. Мягкое ручное надавливание большим и указательным пальцами на живот может помочь в визуализации внутренних органов.
9. Используя тонкие ножницы для радужной оболочки глаза и стараясь не затрагивать крупные сосуды и спинномозговые нервы, сделайте разрез на 1 см в стенке тела параллельно позвоночнику. Расширите этот разрез до 1,5-2,0 см (немного длиннее, чем длинная ось почки), аккуратно раскрыв ножницы пошире после их размещения в первоначальном разрезе.
10. Выведите почку наружу, слегка надавливая на мышечную стенку с обеих сторон почки указательным и большим пальцами. Подверните края кожи ниже наружной почки, которая будет опираться на стенку тела. Пока почка находится снаружи, поддерживайте гидратацию почечной капсулы, применяя стерильный физиологический раствор.
11. С помощью тонких щипцов #5 аккуратно приподнять капсулу почки из паренхимы почки, и тонким скальпелем сделать разрез 2-4 мм в капсуле. Размер разреза определяется размером трансплантата, но должен быть сведен к минимуму для сохранения целостности капсулы.
12. Манипулируйте стеклянной пастеровской пипеткой, которая была натянута тонкой и отполирована огнем с закругленным закрытым концом под капсулой, касательной к поверхности почки. Аккуратно откройте небольшой карман капсулы для трансплантатов, соблюдая большую осторожность, чтобы не повредить паренхиму почки.
13. Разрезанный край капсулы почки приподнимается с помощью тонких щипцов, и трансплантат вводится в карман под капсулой с помощью пипетки из полированного огнем стекла. Несколько графтов могут быть помещены под капсулу почки и равномерно размещены на поверхности почки.
14. Если в процессе прививки капсула обезвоживается, ее следует увлажнить, применив стерильный физиологический раствор.
15. Когда пересадка будет завершена, аккуратно приподнимите боковые стороны разреза мышечной стенки, чтобы вернуть почку обратно в полость тела. Следите за тем, чтобы графты не выскальзывали из-под капсулы.
16. Закройте мышечную стенку одним швом (4-0, FS-2 викриловый шов). Хирургическую процедуру можно повторить на контралатеральной почке путем изменения положения мыши.
17. С помощью зубчатых щипцов совместите края разреза кожи и наложите 2-3 хирургических зажима для закрытия разреза. Введите анальгезию (мы используем 5-10 мг/кг карпрофена с помощью подкожной инъекции) и поместите мышь в боковое лежачее положение в клетке для восстановления. Обеспечьте поддержание температуры тела с помощью тепла от лампы или грелки. Наблюдайте за полным восстановлением мыши, которое должно произойти менее чем через 15 минут.
18. Мышей следует наблюдать в течение следующих 24 часов на предмет признаков послеоперационной боли, кровотечения и/или других осложнений. Регулярно осматривайте хирургические разрезы на наличие признаков инфекции.
19. Удалите раневые зажимы с помощью хирургического устройства для удаления раны через 7-14 дней после операции.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Стерильный хирургический халат	Ветеринарные услуги Среднего Запада	350.79866.2 (Английский
Хирургическая маска	Ветеринарные услуги Среднего Запада	350.50111.2
Стерильные перчатки	Кимберли Кларк	No 55092
Рефлекторная машинка для стрижки ран	Ф.С.Т.	12031-09	Соответствует размеру намоточного зажима
Викриловый шовный материал	Ветеринарные услуги Среднего Запада	295-92100.2 (Английский)	4-0, FS-2, Рассасывающийся
Прямые острые/тупые ножницы	Тонкие научные инструменты (F.S.T.)	14054-13
Щипцы Грефе (зубчатые, зубчатые, изогнутые)	Ф.С.Т.	11055-10 Номер 11055-10
Изофлуран Вапорайзер	Супера Анестезия Иннов	VAP3000
Индукционная камера	Супера Анестезия Иннов	РЭС644
Стеклянные пастеровские пиппеты	Научный центр Фишера	С67050	Длина 5 дюймов
Щипцы Грефе (зубчатые, изогнутые)	Ф.С.Т.	11052-10
Щипцы Грефе (зубчатые, прямые)	Ф.С.Т.	11050-10
Бетадин	Ветеринарный клиника Вебстера	Тел.: 07-836-3379
Стерильный физиологический раствор	Ветеринарные услуги Среднего Запада	193.74504.3	NaCl 0,9%, инъекционный
Аппликатор с ватным наконечником	Ветеринарные услуги Среднего Запада	001.06220.2 (Английский
Зажимы для ран	Брейнтри Сайентиал	АСУ КС	Можно использовать зажимы 7 мм или 9 мм
Изофлуран	Ветеринарные услуги Среднего Запада	193.33161.3 Кабельный номер 193.3161.3
Препарирующий микроскоп	Лейка	L2
Маленькие мышиные носовой обтекатель	Супера Анестезия Иннов	АСС526
Расходомер кислорода	Супера Анестезия Иннов	ОКСИ660
Будет ли ремувер для удаления клипс	Ф.С.Т.	12033-00	всеобщий

) )