Экстракция белка и протеолиз: метод получения белков из образцов ткани опухоли предстательной железы и их ферментативного расщепления в пептиды

Аннотация

Источник: Cheng, L. C. et al. Обогащение фосфопептидом в сочетании с безметочной количественной масс-спектрометрией для исследования фосфопротеома при раке предстательной железы. J. Vis. Exp. (2018)

В этом видео описывается техника экстракции и переваривания белка для получения пептидов из ткани опухоли предстательной железы. Эти пептиды при дальнейшем анализе могут помочь определить новые мишени для онкотерапии.

Протокол

1. Экстракция белка

1. Приготовьте буфер для лизиса (табл. 1). (Объем зависит от количества образцов, которые необходимо собрать.)
2. Забор тканей
   1. Взвесьте опухоль и добавьте 2 мл ледяного буфера для лизиса на каждые 100 мг ткани в культуральной пробирке. (Как правило, требуется от 50 до 150 мг влажного веса тканей.)
3. Гомогенизируйте лизат с помощью ручного или настольного гомогенизатора (импульс 2 раза в течение 15 с). Очистите гомогенизатор перед первым образцом и между образцами, последовательно используя 10% отбеливателя, 70% этанола и деионизированную воду.
4. Чтобы восст....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Сверхнизкотемпературная морозильная камера	Панасоник	МДФ-У76В
Морозильная камера -20 °C	ВВР	СКПМФ-2020
Ковш с поворотным ротором	ThermoFisher Scientific	75004377
Торцевой ротатор	ThermoFisher Scientific	415110Q
Трубки Эппендорфа с низким связыванием белков	Эппендорф	22431081
Лечение трипсином, ТПК	Уортингтон Биокемикалс	LS003740
Лизилэндопептидаза	Вако Пьюр Кемикал Индастриз, Лтд.	125-05061 (Английский
Вода MilliQ			Деионизированная вода используется для приготовления всех растворов и буферов
Звуковой Дисмембратор	Научный центр Фишера	ФБ-120	ультразвуковой аппарат
Политрон Систем ПТ	Кинематика АГ	ПТ 10-35 ГТ	гомогенизатор

)