Методическая статья

Депарафинизация и регидратация участков тканей: двухэтапная процедура удаления парафина с предметных стекол тканей FFPE с последующей регидратацией тканей

30 апреля 2023 г.

В этой статье

Аннотация

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Sugimoto, K. et al. Полногеномный анализ метилирования ДНК при раке желудочно-кишечного тракта. J. Vis. Exp. (2020)

В этом видео мы демонстрируем обработку FFPE или фиксированных формалином парафин-залитых срезов, полученных из ткани опухоли желудочно-кишечного тракта. Этапы депарафинизации и регидратации позволяют обрабатывать образец ткани для последующего аналитического применения.

Протокол

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все процедуры с участием людей были выполнены в соответствии с институциональными, национальными и международными рекомендациями по благополучию человека и были проверены местным институциональным наблюдательным советом.

1. Мытье горок

  1. Подготовьте 10 мкм неокрашенных фиксированных формалином парафинов (FFPE).
  2. Поместите предметные стекла в держатель стеклянного предметного стекла: используйте около 3-5 самых больших предметных стекол поперечного сечения, если только ткань не минимальна, и требуется больше предметных стекол.
  3. Наполните держатель предметного стекла ксилолом и убедитесь, что вся ткань на предметном стекле погружена в воду. Оставьте на 15 минут.
  4. Через 15 минут вылейте ксилол предметными стеклами, удерживаемыми наконечником пипетки, чтобы предметные стекла не выпали.
  5. Влейте еще ксилола до того же уровня, что и раньше. Дайте постоять еще 15 минут.
  6. Через 15 минут снова вылейте ксилол.
  7. Наполните держатель предметного стекла 100% этанолом (EtOH) и убедитесь, что вся ткань на предметном стекле полностью погружена в воду. Дайте постоять 3 минуты.
  8. Слейте этиленоксид, осторожно удерживая предметные стекла. Долейте до того же уровня с большим количеством этиленоксида. Оставьте на 2 минуты.
  9. Снова слейте EtOH и снимите предметное стекло. Аккуратно положите их лицевой стороной вверх на чистое бумажное полотенце для просушки. Оставьте на 10 минут.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
ксилол Сигма-Олдрич214736
100% этанол Сигма-ОлдричNo 24194

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Xylene TreatmentEthanol GradientTissue SectioningHistological PreparationParaffin RemovalTissue ProcessingSlide Holder

Похожие статьи