Все процедуры с участием людей были выполнены в соответствии с институциональными, национальными и международными рекомендациями по благополучию человека и были проверены местным институциональным наблюдательным советом.
1. Окрашивание
- Прежде чем приступить к окрашиванию, сотрите излишки растворов вокруг ткани на предметном стекле папиросной бумагой.
- Размещайте предметные стекла при комнатной температуре и влажности, чтобы избежать высыхания ткани на предметном стекле на протяжении всего процесса окрашивания.
- Окисляйте предметные стекла несколькими каплями марганцовки в течение 5 мин. Следите за тем, чтобы объем марганцовки был достаточным для покрытия участка ткани на каждом предметном стекле
.
- Окисленные стекла промойте дистиллированной водой в банке Коплин с 2-3 сменами. Обратите внимание на синий цвет ткани.
- Теперь отбелите эти предметные стекла, добавив несколько капель щавелевой кислоты в течение 5 мин. Убедитесь, что объем щавелевой кислоты достаточен для полного покрытия участка ткани на каждом предметном стекле
.
- Промойте предметные стекла, погрузив их в банку Coplin, наполненную дистиллированной водой. Выполните полоскание в 2-3 раза.
- Теперь кратковременно промойте эти слайды в 95% спирте, а затем погрузите слайды в раствор эластина (5 г/л) на 8-24 ч.<бр/>
заметка: Раствор эластина летуч, и время его окрашивания относительно долгое, поэтому лучше всего погружать предметные стекла с эластичным окрашиванием в герметичную емкость, например, в прозрачную стеклянную бутылку с герметичным колпачком. Емкость контейнера и объем раствора эластина зависят от количества погруженных предметных стекол, при условии, что он позволяет полностью погрузить все горные стекла.
- Погрузите эти предметные стекла непосредственно в 95% этанол на 1-2 минуты, чтобы хорошо различить каждый участок ткани><.
заметка: Дифференцировка относится к изменению заряда участка ткани, что удаляет излишки окрашивания, поглощенного тканью, и делает цвета более четкими. После окрашивания раствором эластина образцы не следует промывать дистиллированной водой, чтобы избежать трудностей в дифференцировке. Проверьте микроскопически, по мере необходимости, на наличие сине-черных окрашиваний эластичных волокон и серого фона. Лучше немного недодифференцировать ткань, так как последующее противопятно Ван Гизона также может несколько извлечь эластичное пятно.
- Полностью промойте эти горки дистиллированной водой после дифференцировки.
- Закрасьте предметные стекла в растворе Ван Гисона в течение 1 мин.<бр/>
заметка: Объем раствора Ван Гисона должен быть достаточным для полного погружения участка ткани на каждом предметном стекле.
