Расщепление сфероидов для субкультивирования и транспортировки: процедура размножения и переноса сфероидов из нейроэндокринной опухоли тонкой кишки

Аннотация

Источник: Ear, P. H. et al. Установление и характеристика сфероидов нейроэндокринных опухолей тонкой кишки. J. Vis. Exp. (2019)

Это видео демонстрирует стратегию расщепления и размножения сфероидов, полученных из клеток нейроэндокринных опухолей тонкой кишки. Эти сфероиды имеют нейроэндокринные онкомаркеры тонкой кишки и могут распространяться и в дальнейшем использоваться для тестирования противораковых препаратов.

Протокол

1. Расщепление сфероидов SBNET

ПРИМЕЧАНИЕ: Это сделано для расширения и обмена с другими исследователями.

1. С помощью пипетки P1000 механически разорвите ЭКМ и отсасывайте ЭКМ со сфероидами SBNET в стерильную пробирку объемом 1,5 мл.
2. Центрифугируйте при давлении 1 000 x g при 4 °C, удалите всю надосадочную жидкость и поместите пробирку на лед.
3. Добавьте в гранулу в 2-4 раза больше объема нового ECM. Смешайте новый ЭБУ со старыми сфероидами ЭБУ и SBNET, пипетируя вверх и вниз 10 раз, избегая образования пузырьков воздуха.
4. Перенесите 5-20 мкл смеси сфероидов ECM и SBNET на новую пластину и дайте ECM застыть.
5. Накройте новой средой SBNET и переложите в инкубатор. Коэффициент восстановления составляет примерно от 95% до 100%.
6. Для транспортировки сфероидов SBNET в другую лабораторию перенесите сфероиды SBNET с новым ECM в колбу T25 и дайте ECM застыть.
7. Наполните колбу T25 сфероидом SBNET, плотно закрутите крышку и подготовьте посылку для отправки.
8. После получения культуры сфероида SBNET удалите питательную среду и выполните шаги с 1.1 по 1.5, чтобы вернуть сфероиды SBNET в культуру.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
DMEM	Gibco	11965-092 Номер 11965-092	Среда для препарирования тканей
ДМЭМ/Ф-12	Gibco	11320-033	Среда для органоидных культур
ФБС	Gibco	16000044	Реагент для питательных сред
глутамин	Gibco	A2916801	Реагент для питательных сред
инсулин	сигма	И0516	Реагент для питательных сред
Матригель	Корнинг	356235	Матрица для встраивания и привязки Органоиды
Никотинамид	сигма	72340	Реагент для питательных сред
РУЧКА/СТРЕПТОКОКК	Gibco	15140-122	Реагент для питательных сред