Секционирование, окрашивание и ПЭМ-визуализация встроенных экзосом: протокол визуализации структурных особенностей экзосом с помощью ПЭМ

Аннотация

Источник: Jung, M. K. et al. Подготовка образцов и визуализация экзосом с помощью просвечивающей электронной микроскопии. J. Vis. Exp. (2018)

В этом видео описывается техника подготовки тонкого среза встроенных экзосом. Эти срезы могут быть дополнительно окрашены и визуализированы с помощью просвечивающей электронной микроскопии, или ПЭМ, для изучения структурных особенностей экзосом.

Протокол

1. Секционирование экзосом

1. Экзосомный блок получают путем встраивания очищенного образца экзосомы (полученного из супернатанта культуры клеток HCT116) в чистую смесь для встраивания с низкой вязкостью.
2. Разрез экзосомального блока толщиной 60 нм через ультрамикротом.
3. Двойное окрашивание 2% уранилацетатом в течение 20 мин и цитратом свинца в течение 10 мин.<бр/> Для раствора свинца Рейнольдса добавьте 1,33 г нитрата свинца и 1,76 г цитрата натрия в общую сумму 50 мл дистиллированной воды.
4. Наблюдайте за сеткой при просвечивающей электронной микроскопии при напряжении 80 кВ.
5. Нажмите «Получить», а затем нажмите «Файл» и «Сохранить как» в системе ПЗС-камер под электронным микроскопом под напряжением 80 кВ. Следите за автоматическими настройками времени экспозиции.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Ультра-микротом	Лейка	UCT
Уранилацетат	ЭМС	No 22400	Опасное химическое вещество
Цитрат свинца	ЭМС	17900
Просвечивающая электронная микроскопия	Хитачи	Н7600
Никелевая сетка	ЭМС	Г200-Ни
Медная сетка	ЭМС	Г200-Ку
Просвечивающая электронная микроскопия	ДЖЕОЛ	JEM2200FS

г.