Методическая статья

Негативное окрашивание очищенных экзосом: процедура визуализации морфологии экзосом с помощью просвечивающей электронной микроскопии

30 апреля 2023 г.

В этой статье

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Jung, M. K. et al. Подготовка образцов и визуализация экзосом с помощью просвечивающей электронной микроскопии. J. Vis. Exp. (2018)

В этом видео описывается процедура негативного окрашивания очищенных экзосом. Отрицательно окрашенные экзосомы визуализируются с помощью просвечивающей электронной микроскопии. Этот метод помогает визуализировать морфологию экзосом.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Негативное окрашивание

  1. Разгрузите тонкие медные электромагнитные решетки формвар/углеродной пленки 200 меш с покрытием 200 меш в течение 1 минуты с помощью разрядника накаливания.
  2. Зафиксировать очищенные экзосомы 1 мл 2% параформальдегида (PFA) в течение 5 мин.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Пары параформальдегида токсичны. Все работы должны производиться в вентилируемом вытяжном шкафу.
  3. Загрузите 5-7 μл раствора экзосомы суспензии на решетку и инкубируйте в течение 1 минуты. Если концентрация экзосомы слишком высока, уменьшите концентрацию до половины или одной пятой.
  4. Немедленно окрасить ~20 каплями отфильтрованного 1% раствора уранилацетата (UA) на поверхность ЭМ сетки с помощью шприца.
  5. Удалите излишки раствора UA с сетки, соприкоснувшись с краем сетки фильтровальной бумагой.
  6. Быстро промойте сетку каплей воды. Этот шаг позволит удалить излишки окрашивающего раствора.
  7. Поставьте сетку на стол, придерживая ее пинцетом, и накройте сетку частично чашкой для культуры для просушки в течение 10 минут при комнатной температуре.
  8. Храните сетку в коробке электромагнитной сетки для будущего наблюдения с помощью ПЭМ при напряжении 80 кВ.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
УранилацетатЭМСNo 22400Опасное химическое вещество
Просвечивающая электронная микроскопияДЖЕОЛJEM2200FS
Разрядник накаливанияДЖЕОЛJFC1100E
ПараформальдегидЭМС19210
Формвар с углеродным покрытием Медь<бр /> Сетка (200 меш)ЭМСFCF200-CU
Формвар с углеродным покрытием Никель<бр /> Сетка (200 меш)ЭМСFCF200-NI
г.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи