Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Вертикальная рукавная гастрэктомия и фиктивные процедуры
- В день операции взвесьте мышей, чтобы получить исходное измерение веса.
- Оборудуйте операционную систему анестезии, водяную баню с подогревом и грелку. Установите водяную баню на 37 °C и используйте ее для подогрева 0,9% солевого раствора для полива. Очистите операционное поле 70% этанолом и используйте стерильную технику, чтобы открыть автоклавный хирургический пакет и инструменты><.
заметка: Грелка используется для сохранения тепла животного во время операции и восстановления после анестезии.
- Используя индукционную камеру, обезболите мышь 5% изофлураном и расходомО2 со скоростью 1 л/мин. Подтвердите, что мышь находится в подходящей плоскости анестезии, выполнив щипывание пальца ноги. Поддерживайте мышь с 1-3% изофлураном и скоростью потокаО2 0,6 л/мин после достижения постоянной плоскости анестезии.
- После того, как мышь будет обезболиваена, нанесите глазную мазь (см. Таблицу материалов) на ее глаза, чтобы они оставались влажными во время операции. В это время также введите анальгетик, такой как мелоксикам (2 мг/кг подкожно). Застряхните волосы от пупка до подмышечной впадины, осторожно удерживая кожу внизу, чтобы обеспечить напряжение.
- Поскольку кожа мыши тонкая и нежная, следите за тем, чтобы не вызвать повреждений кожи при стрижке шерсти. Очистите кожу повидон-йодом и спиртом.
- Наденьте стерильные перчатки и подготовьте стерильное операционное поле и инструменты. Оставшуюся часть процедуры проведите в стерильной технике. Подготовьте стерильное операционное поле, поместив стерильные хирургические простыни по обе стороны от мыши. Используйте автоклавную оловянную фольгу для создания хирургической простыни для мыши.
- Вырежьте небольшое отверстие в оловянной фольге, чтобы обеспечить доступ к брюшной полости мыши.
- Сделайте разрез кожи от середины живота (пупка) до уровня мечевидного хряща с помощью ножниц для радужной оболочки. Определите белую линию и с помощью ножниц радужной оболочки прорежьте стенку тела вдоль белой линии. Используйте CTA, чтобы мягко приподнять живот над брюшной полостью, а затем тупо рассеките большой сальник из большего изгиба желудка.
- Перевязать короткую желудочную артерию, которая проходит между дном желудка и селезенкой, путем наложения двух лигатур с использованием рассасывающегося шва из моноволокна 7-0. Используйте пружинные ножницы, чтобы разрезать между двумя лигатурами. После того, как артерия будет пересечена, полностью выведите желудок из брюшной полости. Поместите марлю под живот и смочите солевым раствором, чтобы сохранить ткань влажной.
- Для процедуры VSG перевязка выступающих ветвей желудочной артерии и вены рассасывающимся монофиламентным швом 7-0 с помощью конической иглы с использованием 3 накидок на каждый узел. Поместите лигатуры чуть ниже (т.е. по направлению к меньшему изгибу желудка) предполагаемой линии пересечения.
заметка: Предполагаемая линия пересечения начинается на ~2 мм выше (то есть в сторону большей кривизны желудка) сердечной выемки желудка и не менее чем на 2 мм ниже margo pilcatus и простирается до проксимального конца правой доли поджелудочной железы. Как правило, на стенке желудка приходится 4 сосуда, которые необходимо перевязать; Однако это может варьироваться у разных мышей.
- Чтобы предотвратить утечку содержимого желудка во время гастрэктомии, наложите простую непрерывную линию швов, проходящую через обе стенки желудка чуть ниже предполагаемой линии пересечения, используя рассасывающийся монофиламентный шов 6-0 с конической иглой. Начните линию швов справа от пищевода и ниже margo pilcatus и закончите чуть выше поджелудочной железы.
- Поместите гемостатики с тонкими наконечниками над линией шва и с помощью пружинных ножниц разрежьте между линией шва и гемостатиками. Удалите пересеченную ткань желудка из стерильного операционного поля. Используйте КТА для очистки желудка от крови и пищеварения.
- Укрепите прилегание стенок желудка с помощью рассасывающегося шовного материала из мононити 6-0 с конической иглой с использованием простого прерывистого узора.
заметка: Рекомендуется использовать простой прерывистый шовный рисунок, поскольку он обеспечивает более надежное закрытие, чем простой непрерывный шовный рисунок.
- Промывайте остатки желудка солевым раствором на протяжении всей процедуры, чтобы сохранить ткань влажной и чистой. С помощью иглы для зондирования 20G, прикрепленной к шприцу объемом 20 мл, выполните промывание желудка физиологическим раствором. Используйте этот размер, чтобы обеспечить адекватное давление без риска повреждения ткани желудка из-за чрезмерного давления или случайного повреждения ткани желудка при использовании обычной остроконечной иглы.
- Используйте минимум 20 узлов, чтобы надежно закрыть желудок; обратите внимание на закрытие вдоль пищеводной стороны, так как эта сторона более труднодоступна и поэтому часто является местом расхождения.
- Убедитесь, что нет подтеканий, осторожно надавливая на живот с помощью CTA. При обнаружении утечек наложите дополнительные простые прерывистые узлы на участки утечки, а затем снова проведите испытание на герметичность. Проверяйте утечку до тех пор, пока утечка не будет обнаружена.
- Проведите заключительное тщательное промывание желудка, используя не менее 60 мл физиологического раствора, чтобы убедиться, что не осталось инфекционных твердых частиц.
- Поместите желудок обратно в брюшную полость под печенью с помощью CTA. Размещайте CTA вдоль дорсальной стороны брюшной полости, чтобы впитать всю лишнюю жидкость. С помощью тупой иглы 18G введите раствор лактата Рингера (LRS) с антибиотиками или без них (0,5 мл LRS +/- 20 мг/кг энрофлоксацина) непосредственно в брюшную полость, непосредственно перед закрытием.
заметка: Это заменяет потерю жидкости во время операции и обеспечивает метод прямого применения антибиотиков в области операции для содействия восстановлению.
- Закройте слой мышц живота с помощью рассасывающегося шовного материала из мононити 6-0 с конической иглой по простой прерывистой схеме. Затем закройте слой кожи рассасывающимся швом из мононити 6-0 по простой непрерывной схеме.
- Нанесите тканевый клей на кожу и загните кожу поверх линии шва, чтобы закопать шов, чтобы мышь не могла нарушить закрытие раны после операции.
- Выключите изофлуран и дайте мыши восстановиться на грелке в течение 10-15 минут, прежде чем вернуть ее в домашнюю клетку. Не оставляйте животное без присмотра до тех пор, пока оно не придет в сознание и не сможет двигаться.
- Держите животных поодиночке до полного восстановления после операции.
заметка: Если мы хотим получить точные измерения потребления пищи на протяжении всего исследования, мыши должны оставаться в одиночном жилье на протяжении всего исследования. Существует риск обструкции инородного тела при употреблении в пищу подстилки в домашней клетке. Животные должны содержаться в клетках, свободных от подстилки, за исключением материала для гнездования (см. Таблицу материалов).
