Удаление скелетных мышц задних конечностей: процедура иссечения скелетных мышц задних конечностей у мышиной модели

Аннотация

Источник: Bonetto, A. et al. Мышь с карциномой толстой кишки-26 как модель для изучения раковой кахексии. J. Vis. Exp. (2016)

В этом видео мы описываем процедуру вырезания скелетных мышц задних конечностей с модели мыши. Иссеченные мышцы могут храниться при более низких температурах до дальнейшего анализа.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Иссечение тканей и органов

ПРИМЕЧАНИЕ: Для использования тканей в биохимических или молекулярно-биологических анализах, планируйте взвесить каждый орган и ткань и сразу же поместить фрагмент в предварительно помеченные криопробирки. Мгновенно заморозьте в жидком азоте и храните при температуре -80 °C.

1. Во избежание загрязнения образцов тканей мехом распылите 70% этанол по всему телу.
2. Поместите мышь на кушетку для вскрытия в лежачем положении на спине и вытяните конечность вертикально, прикрепив ногу к приподнятому зажиму для бюреты.
3. Захватите кожу нижней конечности щипцами Дюмона, а изогнутыми тонкими ножницами аккуратно удалите кожу и фасцию, обнажив нижележащие мышцы живота нижней конечности.
4. Икроножная мышца на задней нижней конечности определяется по ее зарождению в латеральном и медиальном мыщелках на задней бедренной кости и прикреплению в пяточной кости через пяточное сухожилие.
   1. Приступайте к разрезанию пяточного сухожилия икроножной мышцы. Захватите дистальный конец икроножной мышцы щипцами Дюмона и подтяните мышечный живот к его истоку. С помощью ножниц разрежьте мышцу у начала координат как можно ближе к бедренной кости. Поместите мышцу в блюдо. Немедленно взвесьте его и заморозьте в пробирке в жидком азоте.
      заметка: Следите за тем, чтобы не иссекать камбаловидную мышцу вместе с икроножной мышцей. В этом случае осторожно удалите камбаловидную камбалу, аккуратно оттянув ее щипцами.
5. Приступайте к идентификации и иссечению передней мышцы большеберцовой кости от ее начала на переднебоковой поверхности большеберцовой кости и ее прикрепления в медиальной клинописи через дистальное сухожилие.
   1. Для того, чтобы иметь рычаг, удерживайте ногу, захватывая пальцы указательным и большим пальцами. Введите кончик щипцов Дюмона непосредственно под поверхностное дистальное сухожилие большеберцовой кости и переместите щипцы таким образом, чтобы тупая сторона могла быть использована для отделения живота большеберцовой мышцы от подлежащей соединительной ткани.
   2. Разрежьте дистальное сухожилие с помощью тонких изогнутых ножниц, а затем разрежьте мышцу в начале как можно ближе к большеберцовой кости.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Мыши CD2F1	Харлан	60
Аппараты для анестезии	EZ-анестезия	EZ-7000
центр развертывания office	Ткань-Тек	4583
криостат	Лейка	КМ1850
Пробковые диски	Науки электронной микроскопии	63305
Микротейнер	БД	365873
Стеклянные горки Superfrost plus	ВВР	48311-703
Стрептомицин-пенициллин	Селлгро	30-002-КИ