Внутрислизистая инокуляция раковых клеток на мышиной модели: процедура создания ортотопической модели рака головы и шеи у мышей

Аннотация

Источник: Oweida, A. J. et al. Внутрислизистая инокуляция клеток плоскоклеточного рака у мышей для иммунного профилирования опухоли и оценки ответа на лечение. J. Vis. Exp. (2019)

В этом видео мы разрабатываем ортотопическую модель рака головы и шеи у мышей путем внутрислизистой инокуляции клеточной линии плоскоклеточной карциномы. Мышь-носитель опухоли будет иметь сходство с клинически значимыми симптомами заболевания человека и, таким образом, может быть использована для изучения прогрессирования рака и открытия новых терапевтических стратегий.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Инъекция клеток мышам

1. Приготовьте смесь ячеек:матрица базальной мембраны в соотношении 1:1 (по 50 мкл каждая).
2. Сначала добавьте клетки, затем постепенно пипетируйте матрицу базальной мембраны. Избегайте попадания пузырьков воздуха. Следите за тем, чтобы смесь была приготовлена непосредственно перед инъекцией животного. Добавление клеток к матриксу базальной мембраны в течение длительного периода времени может привести к оседанию клеток в матричной смеси, что затрудняет энергичное встряхивание смеси. Это приведет к значительной вариабельности размеров опухоли у разных мышей.
3. Аккуратно перемешайте. Убедитесь, что все шаги, связанные с матрицей, выполняются на льду. Матрица базальной мембраны полимеризуется при комнатной температуре.
4. Подготовьте шприцы для инокуляции.
5. Загрузите инсулиновые шприцы объемом 0,5 мл (23G) со 100 мкл раствора матрикса клеточной/базальной мембраны.
6. Держите шприцы на льду, чтобы избежать полимеризации матрицы базальной мембраны.
7. Обезболить мышей, поместив их в камеру с изофлураном и кислородом (2,5%).
8. Убедитесь, что мыши глубоко обезболены перед выполнением инъекции (убедившись в отсутствии реакции на защемление пальца ноги).
9. Введите иглу в правую или левую щечную область. Это делается через имеющееся открытое пространство по обе стороны рта.
10. Убедитесь, что язык мыши не мешает.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Язык легко проткнуть, что приведет к опухолям языка. При необходимости переместите язычок в противоположную сторону.
11. Держите шприц параллельно щечной области, находясь внутри ротовой полости.
12. Когда будете готовы к инъекции, оттяните шприц назад и медленно введите шприц под углом 10°.
13. Ввести 100 мкл суспензии матрицы клетки/базальной мембраны в течение 5 с.
14. Удерживайте шприц на месте еще 5 секунд, чтобы убедиться, что весь материал введен в действие.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для контроля мышей без опухоли вводите смесь бессывороточных сред и матрикса (как описано выше) без опухолевых клеток.
15. Осторожно извлеките шприц.
16. Продолжайте вышеописанную процедуру с оставшимися мышами.
17. Оставьте на 1 неделю, пока опухоли не начнут выглядеть грубо (50–200^мм3 для клеток B4B8 и LY2).

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
HBSS	ThermoFisher Scientific	14175079	Без кальция, без магния, без фено-красного
Масс-цитометр Гелоис	Флюидигм	NA
Мембранная матрица Matrigel	Корнинг	КБ-40234Б