Забор хориоаллантоисной мембраны цыплят: метод выделения хориоаллантоисной мембраны опухолевого трансплантата из куриного яйца

Аннотация

Источник: Schmidt, L. B. et al. Модель хориоаллантоисной мембраны цыплят in vivo для оценки периневральной инвазии при раке головы и шеи. J. Vis. Exp. (2019)

Это видео демонстрирует выделение хориоаллантоисной мембраны, несущей опухоль, из куриного эмбриона. Собранный CAM может быть использован для дальнейших применений.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Сбор урожая CAM

1. Приготовьте 6-луночные планшеты с 4% PFA (параформальдегидом) pH 7,0; одна лунка на яйцо, 2 мл на лунку.
2. Принесите яйца на лабораторный стол. С помощью иглы, прикрепленной к шприцу, для перфорации пленочной повязки капните около 300 мкл PFA на CAM, чтобы немного сделать CAM жестче, тем самым облегчив процесс сбора. Повторите это для всех яиц.
3. С помощью ножниц снимите верхнюю половину яичной скорлупы (где находится операционное окно) с прикрепленным к ней CAM (рисунок 1I). Уменьшите размер этой половинки примерно до 3 см в диаметре. Захватите CAM тонкими щипцами и отделите его от яичной скорлупы, поместив в PFA.

Результаты

Рисунок 1: Прививка DRG, клеток и забор CAM: На 8-й день: А. КАМ легко обнаруживается после удаления парафиновой мембраны. В-С. С помощью тонких щипцов DRG помещается на CAM. D. Яйцо накрывают пленочной заправкой и помещают в инкубатор; На 10-й день: В-Пт. Пленочная повязка снимается и располагается ДРГ (стрелка на F). Г-Х

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
PFA (раствор параформальдегида)	Сигма-Олдрич	# П6148-1КГ	Разведите в воде до получения 4% раствора PFA
Тонкие хирургические прямые острые ножницы	Инструменты для точных научных исследований (FST)	#14060-09	Используется для забора ткани CAM на 17-й день
Оплодотворенные яйца Ломана Уайт Леггорн			Оплодотворяют яйцеклетки в первые дни оплодотворения, желательно в первые сутки после оплодотворения. Яйца, используемые в этом протоколе, поставляются с птицефабрики Мичиганского государственного университета
Щипцы Грефе сверхтонкие, прямые	Инструменты для точных научных исследований (FST)	# 11150-10	Используется для пересадки DRG на CAM на 8-й день и для забора ткани CAM на 17-й день