Моделирование внутриопухолевого лечения ингибиторами микроРНК: метод анализа влияния ингибиторов микроРНК на рост опухоли на мышиной модели

Аннотация

Источник: Ramirez-Moya, J. et al. in vivo ингибирование микроРНК для уменьшения роста опухоли у мышей. J. Vis. Exp. (2019)

Это видео демонстрирует in vivo доставку ингибиторов микроРНК в качестве терапевтических агентов против роста опухоли в ортотопических моделях мышей. Внутриопухолевое введение синтетических ингибиторов микроРНК или антагомов позволяет им связываться и ингибировать эндогенные микроРНК, тем самым вызывая повышенную регуляцию мРНК и подавление роста опухоли.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Фланговая инокуляция клеток и лечение внутриопухолевыми антагомиями

1. Подготовка клеток
   1. Разработать клеточную линию Cal62 рака щитовидной железы человека (мутации KRASG12R и p53A161D) для сверхэкспрессии трансгенной конструкции, которая конститутивно экспрессирует GFP и люциферазу (CMV-Firefly Luc-IRES-eGFP). Отбор трансгенных клеток по устойчивости к антибиотикам или путем сортировки GFP-положительных клеток с помощью проточной цитометрии.
   ....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Матрица базальной мембраны: матрица базальной мембраны Matrigel высокой концентрации	Корнинг	#354248
Антагомир: ингибитор микроРНК mirVana	Термо Фишер	4464088	Готовность in vivo
Реагент для доставки in vivo: Реагент Инвивофектамин 3.0	Термо Фишер	ЭКО 3005
Отрицательный контроль: ингибитор микроРНК mirVana, отрицательный контроль #1	Термо Фишер	4464077	Готовность in vivo
XenoLight D-люциферин - К+ соль биолюминесцентный субстрат	ПеркинЭлмер	122799	Разбавлено в PBS
Программное обеспечение для визуализации in vivo: система визуализации IVISLumina II	Штангенциркуль для медико-биологических наук