Ортотопическая инокуляция клеток рака щитовидной железы в щитовидную железу мыши: процедура создания мышиной модели ортотопического рака щитовидной железы

Аннотация

Источник: Джулия Рамирес-Мойя и др. Ингибирование микроРНК in vivo для уменьшения роста опухоли у мышей. J. Vis. Exp. (2019)

Это видео описывает процедуру ортотопической инокуляции клеток рака щитовидной железы в щитовидную железу мышиных моделей, которая затем может послужить ценной платформой для оценки канцерогенеза и обнаружения потенциальных стратегий лечения.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Ортотопическое инокуляция клеток щитовидной железы

1. Подготовка клеток
   1. Разработать клеточную линию Cal62 для рака щитовидной железы человека для сверхэкспрессии трансгенной конструкции, которая конститутивно экспрессирует GFP и люциферазу. Отбор трансгенных клеток по устойчивости к антибиотикам или путем сортировки GFP-положительных клеток с помощью проточной цитометрии.
   2. Выращивайте эти клетки в DMEM с добавлением антибиотиков (пенициллина и стрептомицина) и 10% FBS при 37 °C и 5%_CO2.
   3. Суспендируйте 1 x 10⁵ клеток в 5 мкл PBS.
2. Инокуляция клеток в щитовидную железу мышей
   1. Введите 100 мкл анальгетика (бупренорфина) и 100 мкл антибиотика (цефалоспорина) подкожно 7-недельным мышам BALB/c nu/nu. Продезинфицируйте место инъекции спиртом.
   2. Введите 5 мкл клеточного раствора в щитовидную железу мышей.
      1. Обезболите мышь с помощью 3% изофлурана, смешанного с кислородом, и поместите ее под стереомикроскоп в стерильную проточную камеру. Оцените уровень анестезии с помощью педального рефлекса (твердое сжатие пальца ноги) и отрегулируйте подачу анестетика по мере необходимости, чтобы сохранить операционную плоскость.
      2. Нанесите офтальмологическую мазь на оба глаза, чтобы предотвратить высыхание.
      3. Для каждой мыши продезинфицируйте шею йодоповидоном и сделайте ножницами надрез примерно на 2 см на коже. После открытия обнажите шейку, сместив слюнные железы.
      4. Рассеките мышцы ремня с помощью щипцов и/или ножниц, чтобы обнажить трахею и щитовидную железу. С помощью шприца объемом 10 мкл введите 5 мкл клеточного раствора в правую щитовидную дольку, расположенную сбоку от перстневидного хряща.
      5. Переместите слюнные железы и зашите разрез шелком с помощью плетеных, покрытых, нерассасывающихся швов.
      6. Добавьте йодоповидон в область раны и положите мышь на термическое одеяло, пока она не оправится от анестезии.
   3. На следующий день после операции введите подкожно анальгетик (бупренорфин) и добавьте 3 мл жидкого ибупрофена (40 мг/мл) в 250 мл питьевой воды в течение 1 недели.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Матрица базальной мембраны: матрица базальной мембраны Matrigel высокой концентрации	Корнинг	#354248
Реагент для доставки in vivo: Реагент Инвивофектамин 3.0	Термо Фишер	IVF3005
Программное обеспечение для визуализации in vivo: система визуализации IVIS-Lumina II	Штангенциркуль для медико-биологических наук