Получение суспензии ЭКМ: метод получения гомогенной суспензии из внеклеточного матрикса, полученного из ткани

Аннотация

Источник: Kornmuller, A. et al. Производство пенопластов и микроносителей, полученных из внеклеточного матрикса, в качестве тканеспецифических клеточных культур и платформ доставки. J. Vis. Exp. (2017)

В этом видео описывается приготовление гомогенизированной и переваренной суспензии внеклеточного матрикса из децеллюляризованных и лиофилизированных тканей. Этот метод помогает в изготовлении пористых пенопластов и микроносителей, полученных из ECM, для использования в качестве субстратов в передовых 3D-моделях клеточных культур.

Протокол

1. Обработка децеллюляризованных тканей

1. Децеллюляризация и лиофилизация
   1. Децеллюляризируйте представляющие интерес ткани в соответствии с установленным протоколом.
      заметка: Скаффолды в настоящем исследовании были подготовлены в соответствии с опубликованными протоколами децеллюляризации децеллюляризованной жировой ткани человека (DAT), децеллюляризованной дермальной ткани свиньи (ДДТ) и децеллюляризованного левого желудочка свиньи (DLV). Коммерчески доступный нерастворимый коллаген также может быть использован для изготовления пен и микроносителей, таких как коллаген, полученный из бычьих сухожилий, кото....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Уксусная кислота, ледяная	БиоШоп	ТУЗ222.5
α-амилаза	сигма	101074694	от Aspergillus aryzae
Центрифуга 75004251	Термо Сайентиал		С качающимся ротором ковша для центрифужных пробирок объемом 15 и 50 мл
Центрифужные пробирки (15 мл)	Сарштедт	No 62.554.205 (Английский
Дессикатор	Научный центр Фишера	8624426	Для хранения лиофилизированных ЭБУ и биоскаффолдов
Двойная дистиллированная вода (ddH2O)			От Barnstead GenPure xCAD Система очистки воды
ECM (внеклеточный матрикс)			Выделен из жировой ткани человека, дермы свиньи или миокарда свиньи, как описано в Flynn et al. 2010, Reing et al. 2010 и Wainwright et al. 2010 (ref # 28, 8, 32)
Ручной гомогенизатор	Научный центр Фишера	Тел.: 14-359-251	Скорость: 8 000 - 30 000 об/мин
Аксессуары для гомогенизаторов: щупы для донышка пилы, щупы	Научный центр Фишера	14-261-17	10 x 95 мм
Жидкий азот
Хлорид натрия	БиоШоп	7647-14-5
Натрия фосфат одноосновной	БиоШоп	10049-21-5
Хирургические ножницы	ВВР	82027-590

)