$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Забор спинного мозга
- Усыпьте мышь с помощью камеры CO2. Избегайте вывиха шейного отдела, так как он может привести к повреждению корешков ганглия из-за сдвигающих сил. С этого момента выполняйте все действия в стерильных условиях.
- Замочите животное в 70% этаноле. Этот шаг важен для стерилизации и для предотвращения волочения волос по внутренним органам.
- Дайте мышке высохнуть от этанола. Не допускайте любого контакта этанола с внутренними органами из-за нейротоксичности.
- После высыхания мыши расположите ее с помощью булавок в положении лежа (лицевой стороной вниз). Поместите булавки на каждую заднюю и переднюю конечности.
- С помощью щипцов сделайте разрез по средней линии, проходящий краниокаудально от задней части шеи к поясничному отделу позвоночника. Далее поднимите дермальные лоскуты двусторонне с помощью щипцов и обнажите подкожную клетчатку.
- Пальпируйте череп мыши до достижения краниоцервикального соединения. С помощью ножниц перпендикулярно животному разрежьте шейные мышцы и позвоночник в месте краниоцервикального перехода (7-й шейный позвонок), используя тяжелые щипцы. Рассеките позвоночник каудально и иссекайте позвоночник тяжелыми щипцами до достижения поясничного уровня (уровня задних конечностей).
- Выполните полную каудальную перерезку на уровне поясничного отдела позвоночника (5-го поясничного отдела) с помощью тяжелых щипцов.
- Наведите курсор мыши (лицевой стороной вверх). Нет необходимости закрывать разрез, так как DRG извлекается из нижних уровней позвонков, а не из шейного.
- Разрежьте по средней линии от шеи до живота, втяните кожу сбоку, а затем разрежьте так, чтобы открыть брюшину.
- Удалите внутренние органы внутри брюшины (печень, селезенку, поджелудочную железу, желудок и кишечник) целиком. Далее удаляют органы забрюшинного пространства (т.е. почки и поджелудочную железу). Краниально раскройте грудную стенку.
- С помощью щипцов и хирургического лезвия разрежьте ребра, оставив 5 мм ребер с обеих сторон в стороне от позвоночного столба. В этот момент позвоночный столб отделяется от остальной части тела.
- Дважды промойте позвоночный столб от крови холодным (4 °C) свежим фосфатно-солевым буфером (PBS).