Экстракция спинного мозга: протокол выделения спинного мозга у мышей для исследований in vitro

Аннотация

Источник: Na'ara, S. et al. Моделирование раковой нервной инвазии in vitro: модель ганглия дорсального корня. J. Vis. Exp. (2016)

В этом видео мы описываем пошаговый протокол выделения спинного мозга из мышиной модели для исследований in vitro.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Забор спинного мозга

1. Усыпьте мышь с помощью камеры CO₂. Избегайте вывиха шейного отдела, так как он может привести к повреждению корешков ганглия из-за сдвигающих сил. С этого момента выполняйте все действия в стерильных условиях.
2. Замочите животное в 70% этаноле. Этот шаг важен для стерилизации и для предотвращения волочения волос по внутренним органам.
3. Дайте мышке высохнуть от этанола. Не допускайте любого контакта этанола с внутренними органами из-за нейротоксичности.
4. После высыхания мыши расположите ее с помощью булавок в положении лежа (лицевой стороной вниз). Поместите булавки на каждую заднюю и переднюю конечности.
5. С помощью щипцов сделайте разрез по средней линии, проходящий краниокаудально от задней части шеи к поясничному отделу позвоночника. Далее поднимите дермальные лоскуты двусторонне с помощью щипцов и обнажите подкожную клетчатку.
6. Пальпируйте череп мыши до достижения краниоцервикального соединения. С помощью ножниц перпендикулярно животному разрежьте шейные мышцы и позвоночник в месте краниоцервикального перехода (^7-й шейный позвонок), используя тяжелые щипцы. Рассеките позвоночник каудально и иссекайте позвоночник тяжелыми щипцами до достижения поясничного уровня (уровня задних конечностей).
7. Выполните полную каудальную перерезку на уровне поясничного отдела позвоночника (^5-го поясничного отдела) с помощью тяжелых щипцов.
8. Наведите курсор мыши (лицевой стороной вверх). Нет необходимости закрывать разрез, так как DRG извлекается из нижних уровней позвонков, а не из шейного.
9. Разрежьте по средней линии от шеи до живота, втяните кожу сбоку, а затем разрежьте так, чтобы открыть брюшину.
10. Удалите внутренние органы внутри брюшины (печень, селезенку, поджелудочную железу, желудок и кишечник) целиком. Далее удаляют органы забрюшинного пространства (т.е. почки и поджелудочную железу). Краниально раскройте грудную стенку.
11. С помощью щипцов и хирургического лезвия разрежьте ребра, оставив 5 мм ребер с обеих сторон в стороне от позвоночного столба. В этот момент позвоночный столб отделяется от остальной части тела.
12. Дважды промойте позвоночный столб от крови холодным (4 °C) свежим фосфатно-солевым буфером (PBS).

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
щипцы	Сигма-Олдрич	Ф4142
Хирургическое лезвие	Сигма-Олдрич	Z309036
ножницы	Сигма-Олдрич	С3271
Чашки Петри 35 мм, стеклянное дно	Де Гроот	Номер 60-627860
70% этанол	сигма
Холодный PBS	Биологическая промышленность	02-023-1А