Method Article

Скрининг клеточной смерти с использованием окрашивания DAPI: метод быстрого скрининга ИК-индуцированной клоногенной гибели клеток в раковых клеточных линиях

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Kobayashi, D. et al. Одношаговый протокол для оценки режима радиационно-индуцированной клоногенной гибели клеток с помощью флуоресцентной микроскопии. J. Vis. Exp. (2017)

Это видео демонстрирует методологию скрининга основных профилей гибели клеток в индуцированных ионизирующим излучением (ИК) линиях раковых клеток с использованием анализа окрашивания DAPI. Окрашенные DAPI ядра клеток-мишеней, подвергающихся клеточной гибели, демонстрируют четкую морфологию и могут быть легко идентифицированы с помощью флуоресцентной микроскопии.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Подготовка материалов

  1. Автоклавные покровные стекла
    1. Поместите покровные стекла в стеклянный стакан.
    2. Накройте стеклянный стакан фольгой.
    3. Автоклав при 121 °C при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм в течение 20 мин.
    4. Сушить при температуре 50 °C. Хранить при комнатной температуре в культурном колпаке.
  2. Приготовьте раствор для фиксации: 3% параформальдегид + 2% сахароза в фосфатно-солевом буфере (PBS)
    1. В стеклянный флакон объемом 1000 мл добавьте 700 мл PBS и 30 г параформальдегида.
      осторожность: Параформальдегид вызывает коррозию, надев....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Конфликт интересов не декларируется.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Крышка МацунамиC013001
Параформальдегид Сигма-Олдрич П6148-1КГ
сахароза Сигма-Олдрич84097-250Г
Фосфатно-солевой буфер Космо Био16232000
скальпель Кай МедикалNo20, 520-А
Чашка для клеточных культур 35 мм сокол353001
Инвертированный фазовый микроскоп СимадзуТелефонный номер 114-909
Рентгеновский облучатель Факситронная биоптикаФакситрон RX-650
Квадратное блюдо для культуры КорнингNo 431110
Слайд-стекло МацунамиПро-11
Реагент для окрашивания DAPI Клеточная сигнализация 8961С
Флуоресцентный микроскоп Компания Nikon ЗАТМЕНИЕ Ni
флуоресцентный микроскоп DAPI фильтр Компания NikonU-FUW, BP340-390, BA420IF, DM410
Объектив флуоресцентного микроскопа (20×) Компания NikonПлан Apo λ 20X/0.75
Объектив флуоресцентного микроскопа (60×, масло) Компания NikonПлан Apo λ 60X/1.40 масло
масло ОлимпN5218600
ПЗС-камера Компания NikonДС-Ки2
Программное обеспечение для получения цифровых изображений Компания NikonДокумент NIS-Elements
очиститель объектива Олимп ОТ0552
хлороформ Вако035-02616 (Английский
)

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cell Death ScreeningDAPI StainingIonizing RadiationClonogenic Cell DeathFluorescence MicroscopyApoptosis DetectionMitotic CatastropheSenescence AnalysisCancer Cell LinesFixation Protocol

Related Articles