Экстракция экзосом на основе магнитных шариков: метод выделения специфических экзосом из биожидкостей

Аннотация

Источник: Tu, M. et al. Обнаружение экзосомальных биомаркеров с помощью высвобождения и измерения, вызванного электрическим полем (EFIRM). J. Vis. Exp. (2015)

В этом видео мы демонстрируем процедуру выделения экзосом из целевых биожидкостей с помощью магнитных микрогранул. Эта процедура позволяет быстро захватывать экзосомы, которые могут быть использованы для последующего анализа.

Протокол

1. Экстракция экзосом на основе магнитных шариков

1. Пипеткой нанесите хорошо перемешанный раствор 5 мкл магнитных микрочастиц, покрытых стрептавидином, в 495 мкл буфера с фосфатно-солевым буфером (PBS) в микроцентрифужной пробирке для ресуспендирования шариков. Промойте и повторно суспензируйте шарики 500 μл PBS три раза с помощью магнитного штатива. Штатив представляет собой массив магнитов на боковой стороне корпуса, который может удерживать пробирки микроцентрифуги для образцов.
   1. Для каждой промывки сначала дайте пробиркам постоять на решетке в течение 1 минуты, а затем с помощью наконечника пипетки осторожно удалите буфер над....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Биотинилированное антитело к CD63 человека	Ancell, США	215-030
Dynabeads MyOne Streptavidin T1	Invitrogen, США	65601
Неодиниевые магнетики (диаметр 1/10 дюйма x толщина 1/32 дюйма)	K&J Magnetics, США	DH101
Сверхчистая дистиллированная вода	Life Technologies, США	10977-023
Anti-Fluorescein-POD, Fab фрагменты	Roche, Германия	11426346910
Фосфатно-солевой буферный раствор	Life Technologies, США	10010023
Казеин/ПБС	Fisher Scientific, США	No 37532