Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Электропорация одиночных клеток в органотипических культурах срезов мозга: метод in vitro для доставки плазмид внутрь целевых нейронов в срезах гиппокампа мозга

3.1K просмотров

8 июля 2025 г.

В этой статье

Аннотация

Источник: Keener, D. G. et al. Электропорация одиночных клеток в различных органотипических срезах культуры возбуждающих и классово-специфических тормозных нейронов гиппокампа мыши. J. Vis. Exp. (2020)

Это видео демонстрирует протокол электропорации генов в одиночных клетках как в возбуждающих, так и в тормозных нейронах в ряде культур среза гиппокампа in vitro. Этот метод полезен для изучения конкретных молекулярных и физиологических функций нейронов, включая автономные механизмы клеток и транссинаптические белковые взаимодействия.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Подготовка культуры ломтиков

  1. Готовят органотипические культуры среза гиппокампа мышей с использованием постнатальных мышей в возрасте от 6 до 7 дней обоего пола.
    1. Приготовьте среду для вскрытия органотипической культуры срезов, состоящую из (в мМ): 238 сахарозы, 2,5 KCl, 1 CaCl2, 4 MgCl2, 26 NaHCO3, 12PO4 и 11 глюкозы в деионизированной воде, затем газообразный с 5% CO2<....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

figure-results-1
Рисунок 1: Два репрезентативных изображения стеклянной пипетки. (A) Отображайте пипетки с более низким сопротивлением (6,5 МОм), используемые в данном протоколе, и (B) пипетки с более высоким сопротивлением (10,4 МОм), типичные для протоколов электропорации.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Плазмидный препарат
Набор для очистки плазмидЦягэнNo 12362
Приготовление органотипических культур из срезов
6-луночные планшетыGREINER BIO-ONE657160 (Английский
Щипцы Dumont #5/45ФСТ#5/45Угловые щипцы для рассечения для подготовки органотипических культур ломтиков
Блок фильтрации колбМногородностьSCHVU02REФильтрация и хранение питательных сред
инкубаторсноповязалкаБД К150-УЛ
Измельчитель тканей McIlwainТЕД ПЕЛЛА, ИНК.10180Измельчитель тканей для приготовления органотипических культур ломтиков
Вкладыш для клеточных культур Millicell, 30 ммМногородностьPIHP03050Вкладыши для органотипических культур срезов
ОсмометрПрецизионные системыОСМЕТТ II
Шпатели с покрытием из ПТФЭКоул-ПармерСК-06369-11
ножницыФСТ14958-09
СтереомикроскопОлимпСЗ61
Стерильная система вакуумной фильтрацииМногородностьSCGPT01REФильтрация и хранение ХКБ
Подготовка электродов
Капиллярные стеклаУорнер Инструментс640796
Съемник микропипетокИнструмент Саттера-1000съемник
печьсноповязалкаBD (E2)
Съемник нити накалаИнструмент СаттераFB330Bсъемник
Чашки Фалькона Петри 3,5 ммBD Falcon353001
Воздушный столТМС63-7512Э
ПЗС-камераQ ВизуализацияРетига-2000DCфотоаппарат
Система электропорацииМолекулярные приборыАксопоратор 800АЭлектропоратор
Система флуоресцентного освещенияпредшествующийЛюмен 200
манипуляторИнструмент СаттераМПК-385манипулятор
Программное обеспечение MetamorphМолекулярные приборыПолучение изображений
Перистальтический насосРайнинДинамакс, РП-2Перфузионный насос
Подвижный столЛуигс и Нойман240 XY
спикернеизвестныйКолонки, подключаемые к электропоратору
СтереомикроскопОлимпСЗ30
Настольный инкубаторТермо СайентиалMIDI 40
Вертикальный микроскопОлимпBX61WI
)

Теги