Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Анестезия и канюляция трахеи
- Взвесьте мышь, чтобы определить дозировку обезболивающих препаратов, послеоперационных обезболивающих препаратов и дыхательный объем аппарата искусственной вентиляции легких. Предварительно разогрейте грелку до 37 °C. Хирургическая установка изображена на рисунке 1.
- Мышам вводят внутрибрюшинно смесь кетамина и ксилазина в дозе 80 мг/кг и 10 мг/кг соответственно.
- Быстро сбрейте шерсть мыши на горле и левой стороне грудной клетки с помощью электрической бритвы.
- Проверьте глубину анестезии, зажав хвост и/или задние лапы, и уложите животное в лежачее положение на грелку. Подложите небольшой марлевый компресс под голову животного, чтобы избежать перегрева глаз. Наносите глазной гель, чтобы избежать сухости глаз.
- Закрепите четыре конечности скотчем на поверхности грелки. Проденьте петлю из шелкового шва 5-0 под верхние резцы и приклейте конец петли с помощью скотча к грелке. Это позволит держать рот животного открытым и облегчит канюляцию.
- Нанесите крем для эпиляции на предварительно выбритые участки и аккуратно помассируйте ватным тампоном в течение 1 мин. Протрите излишки шерсти и крема марлей. Используйте капли 0,9% физиологического раствора и марлю для очистки мест разрезов. Наложите кусочки стерильной марли на выбритое горло и грудную клетку и смочите их в йодоповидоне><.
заметка: Мы рекомендуем наносить на места разрезов местный обезболивающий препарат (лидокаин или бупивакаин).
- Установите аппарат ИВЛ на дыхательный объем 7 мл/кг и скорость вентиляции 140 тактов/мин.<бр/>
заметка: Отныне работа под микрохирургическим стереомикроскопом.
- Удерживайте кожу в центре горла и сделайте разрез на 0,5 см по каудальной/головной линии с помощью маленьких ножниц. Отделите доли слюнной железы, затем аккуратно отделите фасцию стерноподъязычной мышцы изогнутыми рассекающими щипцами до тех пор, пока не станут видны гортань и трахея. Закрепите края проема с помощью втягивающих устройств, прикрепленных к эластичным лентам.<бр />
заметка: Проделайте этот шаг без разреза мышц. Обученный оператор сможет интубировать животное через ротовую полость без визуализации трахеи, что делает этот шаг необязательным.
- Аккуратно придерживайте язык боком. С помощью щипцов введите затупленную внутреннюю иглу канюли 16 G в трахею. Визуализируйте правильное введение в трахею через разрез в горле.
- Подключите канюлю к вентилятору и обеспечьте правильную вентиляцию, поместив вытяжную трубку в воду. Наличие пузырьков свидетельствует о правильной интубации.
заметка: Для того чтобы сохранить ткани влажными во время операции, на разрез горла положите стерильную марлю, смоченную 0,9% физиологическим раствором и йодоповидоном. Контролируйте влажность во время процедуры.
2. Лигирование коронарной артерии ПМЖ
- Освободите левую переднюю лапу от клейкой ленты и осторожно переместите мышь в положение правой стороны для пролежней. Закрепите левую переднюю конечность, как только животное окажется в правильном положении.
- Определите линию между левой грудной, малой и большой мышцами и сделайте косой надрез кожи на 1 см ножницами по линии. С помощью рассекающих тупых микроножниц отделите фасцию грудных мышц без разреза. Держите грудные мышцы разделенными с помощью ретракторов, прикрепленных к эластичным лентам.
- Установите аппарат ИВЛ с положительным давлением в конце выдоха (PEEP) 3 см H2O.
- Вскрыть грудную полость с помощью тупых щипцов в 3-м межреберье между 3-м и 4-м ребрами. Избегайте прикосновения к внутренней грудной артерии, так как существует опасность кровотечения. Не прикасайтесь к сердцу или легкому. Внесите в грудную клетку два ретрактора, по одному на каждое ребро (Рисунок 2А).
- С помощью изогнутых тонких щипцов аккуратно извлеките перикард и раздвиньте его, не причинив вреда сердцу и легким.
- Найдите левую переднюю нисходящую (ПМЖ) коронарную артерию. Артерия ПМЖ выглядит как поверхностная ярко-красная линия, идущая от края левого предсердия к вершине.
- С помощью иглодержателя проведите шелковый шов 7-0 под ПМЖ на 2-3 мм ниже левого предсердия. Медленно натягивайте шелк, чтобы избежать разрыва сердечной ткани. Завяжите лигатуру тремя узлами. Нижняя левая часть левого желудочка мгновенно бледнеет после перевязки (рис. 2B–E).
заметка: Важно не углубляться слишком глубоко в полость желудочка или оставаться слишком поверхностным. Для животных, прооперированных в режиме имитации, протяните шовный шелк под ПМЖ и медленно снимите его, избегая разрыва тканей.
- Отпустите ретракторы ребер, зажмите 3-е ребро щипцами и сделайте два прохода шелковым швом 6-0 под 3-м и 4-м ребрами.<бр/>
осторожность: Не проделывайте сердцевину или легкое. Пока не затягивайте узлы.
- Налейте три капли 37 °C 0,9% физиологического раствора на отверстие и закройте выхлопную трубку на 2 или 3 дыхательных цикла, чтобы правильно накачать легкие. Затяните шов и закрепите двумя накидками.
- Расслабьте удерживающие мышцы ретракторов и помогите им вернуться на правильное место.
- Сомкнуть кожу грудной клетки двумя швами из шелкового шва 5-0 и закрепить двумя накидками. Закройте кожу горла одним стежком из шелка 5-0 и закрепите двумя накидками.
