Все процедуры, связанные с животными моделями, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE
1. Хирургическая имплантация телеметрической системы мониторинга температуры
- По прибытии от поставщика позвольте животным отдохнуть в виварии не менее 1 недели до операции, чтобы свести к минимуму стресс от транспортировки.
- Групповое размещение мышей (максимум 5 человек в клетке в соответствии с местными рекомендациями IACUC) до дня операции по имплантации температурного телеметрического устройства. Размещайте их в стандартных клетках размером 7,25 дюйма (Ш) x 11,75 дюйма (Д) x 5 дюймов (В) с подстилкой из кукурузных початков. Поддерживайте световой цикл на световом цикле 12 x 12 (вкл.: 7 утра; выключено: 7 вечера). Поддерживайте температуру в помещении на уровне 20–22 °C и относительную влажность (RH) на уровне 30–60%. Обеспечьте стандартную диету и воду в неограниченном количестве до протокола EHS.
заметка: Обоснование индивидуального содержания заключается в том, чтобы избежать частых боевых травм у самцов мышей C57bl/6J и обеспечить широкие возможности для спонтанного бега колесом для каждой мыши.
- Для размещения телеметрических приборов необходимо обезболить мышь изофлураном (4%, 0,4–0,6 л/мин потока О2) в индукционной камере. Затем поместите мышь под непрерывную анестезию через носовой конус (1,5%, 0,6 л/мин).
- Используйте глазную смазку, например ветеринарную мазь, чтобы защитить глаза животного от повреждений или травм во время операции.
- Чтобы подготовить место операции, побрейте нижнюю часть живота с помощью небольших машинок для стрижки шерсти животных или используйте имеющееся в продаже средство для удаления волос. В течение этого времени введите первую дозу подкожного бупренорфина (0,1 мг/кг).
- Протрите область тремя полосками повидон-йода (или аналогичного бактерицидного скраба) с последующим полосканием 70% изопропиловым спиртом (или стерильным физиологическим раствором в зависимости от местных ветеринарных требований). Затем перенесите мышь в операционную область.
- Используйте клейкую простыню, чтобы изолировать место операции на мыши. Используя стерильные инструменты и асептическую технику, сделайте разрез ~1 см по средней линии вдоль белой линии, примерно в 0,5 см от реберного края. Затем отделите кожу от мышечного слоя и сделайте чуть меньший разрез на белой линии, стараясь не повредить кишечник или внутренние органы.
- Как только мышечный слой будет открыт, поместите стерильный телеметр (миниатюрный многоразовый радиотелеметрический прибор без батареек; 16,5 x 6,5 мм) во внутрибрюшинную полость перед каудальными артериями и венами и дорсально к органам пищеварения, чтобы он мог свободно плавать><.
заметка: Все телеметры очищаются водой с мылом, тщательно промываются и стерилизуются газом с окисью этилена между использованиями. Если газовая стерилизация недоступна, для дезинфекции и стерилизации телеметров допускается погружение в стерилизационные растворы (в соответствии с рекомендациями производителя по разбавлению и времени погружения).
- Закройте брюшное отверстие стерильным рассасывающимся швом 5-0 и закройте кожу простым прерывистым швом с пролиновым швом 5-0.
заметка: Разрешение телеметру плавать в брюшном отделе без привязки его к брюшной стенке (метод, рекомендованный производителем) было продемонстрировано успешным и предпочтительным для устранения избыточного напряжения брюшной стенки во время заживления. Кроме того, это никак не влияет на способность приемника получать сигнал от излучателя.
- Поместите мышь в чистую клетку, подложив под нее портативную грелку. Наблюдайте за мышью каждые 15 минут в течение первого часа восстановления после анестезии, а затем возвращайтесь в помещение для содержания животных.
