$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Протокол EHS
- В ночь перед протоколом EHS поместите мышь в климатическую камеру при комнатной температуре (~25 °C, ≈относительная влажность 30%), чтобы акклиматизироваться в камере.
- Используйте систему сбора данных для сбора данных о непрерывной температуре ядра (Tc), усредненной с интервалом в 30 секунд в течение ночи.
- Утром в день проведения протокола EHS убедитесь, что мышь находится на уровне или ниже нормального диапазона суточной температуры, прежде чем повышать температуру в камере (т. е. 36–37,5 °C). Это гарантирует, что у мыши не будет лихорадки и она не испытает чрезмерного стресса в этот период.
- Как только мышь станет устойчивой и будет находиться в диапазоне нормальной температуры тела в состоянии покоя, удалите корм и воду и взвесьте животное. Закройте дверцу камеры и увеличьте температуру камеры до целевого значения 37,5 °C и относительной влажности 40–50% или желаемой температуры окружающей среды и влажности. Проверьте температуру и влажность в камере с помощью откалиброванного монитора температуры и влажности.
- Окружите камеру плотной шторой, чтобы свести к минимуму свет и помехи во время протокола. Непрерывный мониторинг мыши во время протокола с помощью удаленных камер с ИК-подсветкой. Сфокусируйте вторую камеру на мониторе температуры и влажности, расположенном рядом с беговым колесом. Внесите все изменения в контроллер в соответствии с заданным значением климатической камеры, чтобы обеспечить точные показания температуры рядом с животным.
- Как только камера достигнет своей целевой температуры, измеренной второй камерой на мониторе температуры (это может занять ~30 минут), быстро откройте дверцу камеры и поместите мышь в колесо принудительного хода.
- Запустите протокол принудительного вращения колеса со скоростью 2,5 м/мин и увеличивайте скорость на 0,3 м/мин каждые 10 минут, пока мышь не достигнет Tc 41 °C. Как только мышь достигнет этой внутренней температуры, позвольте скорости оставаться постоянной до тех пор, пока не исчезнут симптомы, характеризующиеся очевидной потерей сознания, падением назад или обмороком, а также неспособностью продолжать бежать или удерживать руль. Подтвердите этот момент времени, когда мышь совершает три оборота в обратном направлении на колесике без признаков физической реакции. В качестве альтернативы можно определить гуманную конечную точку в соответствии с местными правилами IACUC, чтобы определить, когда следует остановить протокол (например, когда Tc ~43 °C). Эта конечная точка немного превышает ограничение симптомов практически у всех мышей.
- Чтобы выполнить протокол быстрого охлаждения (R), как только мышь достигнет предела симптомов, остановите колесо и немедленно снимите его с колеса принудительного хода. Взвесьте мышь и поместите ее обратно в домашнюю клетку, чтобы она восстановилась при комнатной температуре. В течение этого времени оставьте дверцу камеры открытой и верните заданное значение инкубатора к комнатной температуре, чтобы камера могла быстро остыть. Результатом этой процедуры является >99% долгосрочной выживаемости.