$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Лапаротомия
- Обезболивайте животных ксилазином (10 мг/кг) и раствором кетамина (80 мг/кг) подкожно (0,1 мл/10 г массы тела) с помощью шприца объемом 1 мл и иглы 13 х 0,45 мм 26 г 1/2. Проверьте достаточную глубину анестезии, зажав палец ноги. Контролируйте температуру тела с помощью подогреваемых прокладок. Убедитесь, что все хирургические материалы стерильны.
- Очистите область живота 5% раствором повидон-йода и с помощью триммера удалите волосы между грудью и нижней частью живота (примерно 2 см2 ). Очистите операционную область 70% спиртом.
- Обездвижите животное на хирургической доске с помощью хирургической ленты. Ножницами разрежьте 5 мм кожи горизонтально, на верхней части живота и на 1 см ниже мечевидного отростка. Повторите разрез на брюшине. Результатом этого станет лапаротомия с минимальным обнажением полости.
2. Обнаружение и обнажение поджелудочной железы
- С помощью втягивающего устройства потяните печень к голове мыши, на расстоянии ~1 см от кишечника.
- Найдите область поджелудочной железы, в которую будет вводиться таурохолат натрия (головка поджелудочной железы). Расположите двенадцатиперстную кишку относительно печени — под печенью, с правой стороны (слева при взгляде на мышь). Двенадцатиперстная кишка является первой частью тонкой кишки и соединена с конечной частью желудка.
- С помощью щипцов поднимите печень по направлению к голове животного и осторожно потяните за тонкую часть кишечника. Зафиксируйте два боковых конца тонкой кишки полипропиленовым швом 6-0, чтобы лучше рассмотреть дистальный отдел общего желчного протока.
3. Индукция тяжелого острого панкреатита
- Временно окклюзируйте проксимальный общий желчный проток с помощью зажима для микрососудов, чтобы предотвратить утечку ретроградной инфузии в печень. Общий желчный проток можно увидеть на печени двенадцатиперстной кишки, и его соединение с двенадцатиперстной кишкой будет казаться белым. Обнажите орган из брюшной полости.
- Проколите периампулярную область (беловатую часть стенки тонкой кишки) для доступа к общему желчному протоку иглой 0,4 мм, соединенной с полиэтиленовой трубкой диаметром 0,54 мм.
- Сделать временную окклюзию дистального отдела общего желчного протока с помощью 8-0 Наложение шва для предотвращения вытекания раствора таурохолата натрия в двенадцатиперстную кишку.
- Запустите инфузионный насос и запрограммируйте инфузию 2,5% раствора таурохолата натрия (разведенного в 0,9% физиологическом растворе) с постоянной скоростью 10 мкл/10 г массы тела в течение 3 мин.
- После инфузии удалите микрососуд клипсы, временный 8-0 шов, а также инъекционная игла из желчного протока поджелудочной железы для восстановления физиологического оттока желчи.
- В конце зашить брюшную полость неабсорбирующим монофиламентным полипропиленовым швом. Время между лапаротомией и наложением конечного шва должно составлять не более 30 минут (см. рисунок 1).
- После операции животных размещают в полиэтиленовых ящиках, выстланных древесной стружкой, а также водой и едой в неограниченном количестве.
- Обрабатывайте контрольных мышей так же, как и подопытных, но следите за тем, чтобы инфузия состояла только из физиологического раствора. Проведите хирургическую процедуру и инфузию физиологического раствора (10 мл/мин, в течение 3 минут) в контрольной группе (ШАМ) для устранения воспалительного смещения, вызванного хирургическим вмешательством и канюляцией.
- Применяйте трамадол в дозе 12,5 мг/кг подкожно каждые 8 часов, начиная с периода послеоперационного восстановления.
