Пренатальное извлечение эмбрионов мышей: процедура забора эмбрионов у беременной мыши

Аннотация

Источник: Юн, К. Оценка дефектов обструкции соединения мочевыводящих путей с помощью инъекции метиленового синего красителя. J. Vis. Exp.(2017)

Это видео демонстрирует получение эмбрионов от беременной мыши. Восстановленные перинатальные эмбрионы могут быть использованы в качестве модельных систем для изучения развития млекопитающих.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Вскрытие пренатальных эмбрионов

1. Очистите ножницы и щипцы для препарирования 70% этанолом.
2. Чтобы собрать перинатальные эмбрионы в точке E18.5 или E19.5, сначала усыпьте беременных мышей с помощью ингаляции CO₂, а затем выполните вывих шейки матки в соответствии с этическими рекомендациями><. заметка: Беременная самка мыши обычно рожает, начиная с E18.5, однако более крупными почками легче манипулировать. Поэтому почкам на Е19,5 ближе к роду легче провести этот анализ. Однако детеныши с двусторонней обструкцией мочевыводящих путей умирают после рождения. В зависимости от особенностей подопытных мышей следует эмпирически определить подходящий день/время сбора.
3. Распылите 70% этанол на вентральную поверхность брюшной полости, а затем откройте брюшную полость вентрально с помощью ножниц и щипцов.
4. Приподнять всю матку и отделить ее от тела, разрезав ножницами-препарантами на кончиках маточных рогов.
5. Промойте всю матку 1x PBS в чашке Петри.
6. Разрезать матку сегментарно с помощью пресекающих ножниц и удалить плацентарный децидуал с помощью рассекающих щипцов, чтобы обнажить эмбрионы в желточных мешках.
7. Сначала удалите желточный мешок, а затем удалите амниотическую оболочку с помощью рассекающих щипцов, чтобы освободить перинатальные эмбрионы.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Деликатные операционные ножницы	Робоз Хирургический Инструмент Ко.	РС-6702
Микрорассекающие щипцы	Робоз Хирургический Инструмент Ко.	РС-5135
пинцет Дюмона; Узор #5	Робоз Хирургический Инструмент Ко.	РС-5045
Quality Biological Inc. ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЙ РАСТВОР - 500МЛ	Fisherscientific	Тел.: 50-983-204