$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Подготовка животного
- Введите обезболивание за 30 минут до операции (4 мг/кг карпрофена и 0,1 мг/кг бупренорфина).
- Запишите массу тела мыши, чтобы скорректировать дозу Rose Bengal для введения (10 мкл/г, т. е. 100 мкг/г).
- Поместите мышь в индукционную камеру со скоростью потока изофлурана 4% для обезболивания ее до тех пор, пока самопроизвольное движение тела и вибриссы не прекратятся.
- Перенесите мышь в стереотаксическую рамку и поместите ее в положение лежа носом в маску для анестезии. Зафиксируйте животное и поддерживайте концентрацию изофлурана на уровне 4% в течение 1 мин. Затем уменьшите и поддерживайте концентрацию изофлурана на уровне 2%.
- Аккуратно введите ректальный зонд, чтобы контролировать температуру на протяжении всей хирургической процедуры. Установите соответствующую грелку с обратной связью так, чтобы она поддерживала температуру тела мыши на уровне 37 °C.
- Нанесите глазную мазь декспантенол на оба глаза и очистите кожу и окружающую шерсть дезинфицирующим средством.
2. Модель фототромбоза
- Сделайте продольный разрез на 2,0-2,5 см и втяните, чтобы обнажить череп. Выполняйте обнажение черепа с одним разрезом, чтобы избежать осложнений на рану.
- Аккуратно снимите надкостницу ватой и определите коронковые швы.
- Наденьте защитные очки, включите лазер с длиной волны 561 нм и отметьте брегму на +3 мм влево.
- Выключите лазер, прикрепите наклейку с отверстием диаметром 4 мм, расположенную по отмеченным выше координатам.
- Введите мышке бенгальскую розу (10 μл/г) внутрибрюшинно. Поместите лазерный луч на расстоянии 4-5 см от черепа, включите лазер с длиной волны 561 нм и освещайте череп в течение 20 минут.
- Нанесите две капли 0,9% физиологического раствора на череп для регидратации, зашите рану и поместите животное в камеру восстановления при температуре 37 °C для восстановления после анестезии. Через 1 ч верните мышей в клетки в помещении с регулируемой температурой.
- Вводите анальгезию каждые 12 ч в течение 3 дней после операции (4 мг/кг карпрофена и 0,1 мг/кг бупренорфина).