Мышиная модель трансплантации островковых клеток: хирургический метод вливания островков поджелудочной железы в воротную вену и профилактика послеоперационных кровотечений

Аннотация

Источник: Gou, W. et al. Минимизация кровотечения из воротной вены после инфузии при трансплантации внутрипеченочных островков у мышей. J. Vis. Exp. (2021)

В этом видео мы описываем процедуру введения островковых клеток поджелудочной железы в воротную вену печени с последующим нанесением гелевой пены для успешной профилактики кровотечения. Послеоперационные кровотечения являются частой причиной высокой смертности при трансплантации островковых клеток.

Протокол

1. Трансплантация островков

1. Индуцировать и поддерживать мышь под общей анестезией с помощью 2% изофлурана. Проверьте на отсутствие педальных рефлексов, чтобы обеспечить правильную обезболивание животного.
2. Побрейте и удалите шерсть в области живота мыши.
3. Ввести однократную предоперационную дозу бупренорфина (0,1 мг/кг в/ч).
4. Продезинфицируйте операционную область тремя чередующимися салфетками с содержанием 2% йода и 75% спирта.
5. Выполните лапаротомию микроножницами, чтобы сделать разрез 1-1,5 см.
6. Вскройте брюшную полость с помощью ретрактора. Затем выберите метод А или метод Б, как описано ниже.

Метод A: (остановить кровотечение с помощью гелевой пены, Рисунок 1A)

1. Подготовка мыши
   1. Наложите на разрез стерильную марлю.
   2. Аккуратно вытащите кишечник с помощью щипцов и держите его на марле.
   3. Определите воротную жилу по ее расположению и хорошо обнажите ее.
   4. Накрывайте кишечник теплой марлей, влажной с солевым раствором, в течение всей операции.
2. Введите островковую иглу инсулинового шприца через воротную вену рядом с двенадцатиперстной кишкой (рисунок 1B). Для этого держите иглу отверстием (скосом) вниз и расположите угол поверхности отверстия параллельно стенке воротной жилы, прежде чем проникнуть через стенку.
   1. Потяните за поршень, чтобы набрать немного крови (20-50 мкл) в шприц, чтобы сначала смешать островки.
   2. Медленно вводите островки в портальную вену, многократно вытягивая и нажимая на углубление.
   3. Поместите кусочек гелевой пены (размером примерно 0,5 см х 0,5 см), чтобы покрыть место инъекции.
   4. Придавите гелевую пену ватным наконечником, вытаскивая иглу из воротной вены.
   5. Продолжайте надавливать на гель в течение примерно 2 минут, чтобы убедиться в отсутствии активного кровотечения.
   6. Переверните ватный кончик над гелевой пеной и в сторону от нее, чтобы убедиться, что гелевая пена хорошо покрывает воротную вену.

Метод B: (остановить кровотечение с помощью жирового пакета, Рисунок 1C)

1. Тщательно обнажите воротную вену.
   1. Используйте два ватных наконечника, чтобы удерживать обнаженную воротную вену как с левой, так и с правой стороны.
   2. Определите жировую прокладку между двенадцатиперстной кишкой и воротной веной.
   3. Проникните через жировую подушку перед введением иглы в воротную вену (рисунок 1D).
   4. Влейте островки, следуя аналогичной процедуре, описанной выше в методе А.
   5. Вытащите иглу, одновременно надавливая на жир ватным кончиком.
   6. Продолжайте надавливание на жировую подушку в течение 1 минуты после извлечения иглы.
2. Убедившись, что кровотечения из воротной вены нет, аккуратно верните кишечник в брюшную полость в исходное положение.
3. Оставьте 0,5 мл теплого физиологического раствора (36-37 °C) в брюшной полости перед закрытием.
   заметка: Теплый солевой раствор способствует перистальтике кишечника после операции и восстановлению, а также предотвращает некроз кишечника.
4. Закройте мышечный слой швом 5-0.
5. Закройте слой кожи швом 4-0.
6. Поместите мышь в чистую клетку на грелку до полного восстановления от анестезии.
7. Продолжайте давать обезболивающее средство (например, бупренорфин 0,1 мг/кг в/ч) каждые 12 ч и дополнительное тепло в течение 48 ч после операции><. ПРИМЕЧАНИЕ: Процедура трансплантации островковых клеток занимает примерно 15-20 минут.

Результаты

Рисунок 1: Иллюстрация процедур трансплантации внутрипеченочных островков.(А, В). Схемы ключевых шагов, используемых в методе А и методе В. (В, Г). Островки вводились непосредственно через воротную вену (С) или косвенно через жировую похлопывание (D).

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
10% нейтральный буферизованный формалин v/v	Научный центр Фишера	23426796
1 мл Шприц с иглой	АХС	АХ01Т
Шприц 20 мл	БД	301031
Иглы для подкожных инъекций 25G x 5/8"	БД	305122
Салфетки для приготовления алкоголя, стерильные	Научный центр Фишера	Тел.: 22-363-750
Система анестезии для животных	VetEquip, Inc.	Корпорация 901806
Бупренорфина гидрохлорид, инъекции	ООО «Пар Стерильные Продукты»	НДЦ 42023-179-05
Абсолютный этанол (200 proof), класс молекулярной биологии	Научный центр Фишера	BP2818500
Сверхтонкие ножницы для микропрепарирования 4" прямые острые	Робоз Хирургический Инструмент Ко.	РС-5882
Гельпен (рассасывающаяся желатиновая губка USP)	Компания Pharmacia & Upjohn	Номер 34201
Щипцы Graefe 4" с очень нежным наконечником	Робоз Хирургический Инструмент Ко.	РС-5136
Грелка	амазонка	B07HMKMBKM
Иглодержатель Hegar-Baumgartner 5.25"	Робоз Хирургический Инструмент Ко.	РС-7850
Инсулиновый шприц с иглой 27 калибра	БД	879588
Йодные прокладки	Научный центр Фишера	19-027048 (Английский
Изофлуран	Пирамал Реанимация	НДЦ 66794-017-25
Полипропиленовый шовный материал 4-0	Мед-Вет Интернэшнл	МВ-8683
Полипропиленовый шовный материал 5-0	Мед-Вет Интернэшнл	МВ-8661
Натрия хлорид, 0,9% раствор для внутривенного введения	ВВР	2В1322К
Простыня хирургическая, стерильная	Мед-Вет Интернэшнл	ДР1826

)