Забор неповрежденных яичников у мыши: хирургическая процедура для выделения полного яичника от мышиной модели

Аннотация

Источник: Mason, J. B. et al. Процедуры трансплантации ортотопических яичников для исследования влияния старения яичников на продолжительность жизни и здоровья у самок мышей. J. Vis. Exp. (2018)

В этом видео мы описываем хирургическую процедуру по забору неповрежденного яичника из модели мыши.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Трансплантация интактных яичников старым мышам

ПРИМЕЧАНИЕ: Этот протокол описывает процедуру, используемую во время переноса яичников от молодой мыши (в возрасте 60 дней) к самке в пострепродуктивном возрасте (в возрасте 12 месяцев) той же инбредной линии. Та же процедура используется для трансплантации яичников между любыми двумя самками мышей.

1. Взвешивают и обезболивают донорское животное путем внутрибрюшинного (в/в, 27 г иглы) введения, например, с помощью коктейля из кетамина, ксилазина и ацепромазина (65 мг/кг кетамина, 13 мг/кг, ксилазина 2,0 мг/кг, ацепромазин; доза коктейля - 6,5 мл/кг). Верните животное в отапливаемую домашнюю клетку до тех пор, пока анестезия не подействует.
2. После обезболивания извлеките животное из домашней клетки и положите на теплые бумажные полотенца. С помощью машинок для стрижки (предпочтительно лезвие #40) удалите волосы на несколько мм от боковой до средней линии с каждой стороны, начиная чуть ниже ребер и двигаясь дистально, подготавливая подстриженный «участок» площадью примерно 2-3 см квадратом с каждой стороны лежащей мыши, оставляя полоску волос примерно на 1-2 см, покрывающую среднюю линию.
3. Слегка протрите обрезанные участки 70% этанолом и нанесите раствор бетадина на обрезанный участок с помощью тампона с ватным наконечником.
4. Нанесите гель с антибиотиком для защиты глаз и введите мелоксикам (2,0 мг/кг) подкожно (S.C., игла 27 га) на боковую поверхность шеи животного для послеоперационного обезболивания.
5. Поместите животное в положение лежа на нагретое стерильное операционное поле и протрите подстриженную область ватной марлей, пропитанной на 70% этанолом, размером 2 см х 2 см.
6. Сделайте парапоясничный разрез 1,0-1,5 см и тупо рассеките кожу от подлежащей фасции. Сделайте еще один разрез через фасцию. Тупо рассекайте латерально под этой фасцией как можно поверхностнее, пока не дойдете до брюшной полости
7. Наложите на разрез небольшую хирургическую простыню (отрезанную из марли размером 2 см х 2 см) и смочите простыню стерильным физиологическим раствором.
8. С помощью небольших щипцов найдите жировую ткань, которая окружает яичник, в брюшной полости, аккуратно извлеките жировую подушку и яичник и поместите их на смоченную марлевую простыню. Жировой пакет яичника будет казаться «белее», чем окружающая жировая ткань.
9. Поместите 1,5-дюймовый зажим Bulldog на жировую подушку (стараясь не закупоривать яичниковую сумку), чтобы удерживать тракт на месте во время процедуры.
10. Переместите препарирующий микроскоп на место и четко определите яичниковую сумку. Захватите бурсу двумя щипцами и разрежьте овариальную сумку напротив ворот яичника, чтобы обнажить яичник. Если предполагаемая область доступа к бурсе сильно васкуляризирована, нанесите каплю адреналина (1:100 000) с помощью шприца на поверхность бурсы, чтобы уменьшить кровотечение во время разрыва.
11. Аккуратно удалите яичник из яичниковой сумки и иссеките яичник, пережав ворота яичника с помощью часовых щипцов, чтобы предотвратить кровотечение.
12. Поместите донорский яичник в часовое стекло, наполненное стерильным физиологическим раствором 4° C, неплотно накройте и отложите до тех пор, пока не будете готовы к трансплантации.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Препарирующий микроскоп	Любой рассекающий прицел с регулируемым рабочим расстоянием.
Рециркулятор теплой воды и подходящая прокладка для вашего размера хирургического/восстановительного поля.	Страйкер/Гаймар	ТП700	Циркуляционные водяные прокладки обеспечивают равномерную и постоянную температуру рабочих и восстановительных полей.
Хирургические инструменты – инструменты для диссекции доступа к репродуктивным путям			Выбор конкретных хирургических инструментов очень специфичен для хирурга
Шовный материал для овариальной сумки	Шовные материалы	2809G: 9-0 или 2810G: 10-0 ETHILON BLACK 5" BV130-5 КОНУС	Шов 10-0 может быть трудно обнаружить, если его уронить на операционное поле.
Абсорбируемый желатиновый бисквит	PFIZER	Гельпена-PFIZER 09-0315-08	Нарезать небольшими (~2 мм) кусочками в стерильных условиях.
Скобы для закрытия кожи	Бектон Дикинсон	MikRon Autoclip 9 мм (BD 427631)
Глазная мазь.	MWI Veterinary Supply Co.		Пералюбовая стерильная офтальмологическая мазь
Шприцы для обезболивания, обезболивания и адреналина	MWI Veterinary Supply Co	БД 305536	27 г x 3/8 дюйма, внутрикожный скос 1/2 мл
Шприцы для физраствора.	MWI Veterinary Supply Co	BD 309657.	Шприц 3 мл, наконечник Люэр-Лока, игла 27 г
Машинки для стрижки/лезвия	Андис	Аккумуляторная машинка для стрижки съемных лезвий Super AGR+ ™ и лезвие CeramicEdge® #40.	Любые машинки для стрижки с тонким лезвием.
этанол	Университетское химическое снабжение		Разбавьте до 70% для использования.
Раствор бетадина	MWI Veterinary Supply Co.	No 3233
2х2 марлевые салфетки	MWI Veterinary Supply Co.	3073	Автоклавный с хирургическими пакетами
Бусины из боросиликатного стекла	Сигма-Олдрич Ко	Z273619	Автоклав в пробирках для синтилирования
4-винилциклогексена диепоксид	Сигма-Олдрич Ко.	94956