Катетерное внутривенное введение экспериментальных агентов: техника внутривенной доставки экспериментальных агентов через яремную вену на мышиной модели

Аннотация

Источник: Bornert, A. et al. in vivo двухфотонная визуализация мегакариоцитов и протромбоцитов в костном мозге черепа мыши. J. Vis. Exp. (2021)

В этом видео мы описываем метод имплантации катетера в яремную вену мышиной модели, через который экспериментальные агенты, такие как лекарства и индикаторные красители, могут быть доставлены внутривенно in vivo. Такая компоновка при подключении к другим системам также может быть использована для мониторинга гемодинамики и забора крови.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Подготовка мышей и установка катетера в яремную вену

ПРИМЕЧАНИЕ: Здесь использовали самцов или самки, 5-7-недельных мышей-репортеров mTmG (B6.129(Cg) Gt(ROSA)26Sortm4(ACTBtdTomato,-EGFP)Luo10), скрещенных с мышами Pf4-cre, что позволило интенсивно мечить зеленым флуоресценцией мегакариоциты и тромбоциты. Перед началом эксперимента разогрейте нагревательную камеру микроскопа в течение нескольких часов.

1. Транспортируйте мышь в комнату визуализации и приступайте к анестезии.
   1. Обезболивание мышей путем внутрибрюшинного (в/в) введения раствора кетамина (кетамина (100 мкг/г) и ксилазина (10 мкг/г) (5 мкг/г).<бр/> заметка: Повторное введение кетамина/ксилазина здесь используется и работает хорошо, но требует прерывания записи для регулярного повторного введения. В качестве альтернативы, если имеется аппарат для анестезии, индукция анестезии может быть выполнена с помощью кетамина/ксилазина и впоследствии поддерживаться при вдыхании газов (смеси изофлурана, воздуха и кислорода).
   2. Заменяйте животное в клетку до тех пор, пока оно не достигнет глубокой анестезии. Поместите мышь на нагретую до 37 °C пластину для всех последующих манипуляций.
      заметка: Пока животное достигает глубокой анестезии, включите микроскоп и все оборудование и настройте различные параметры, необходимые для начала эксперимента после завершения операции. Здесь процедура длится всего 3 часа и является терминальной. После эксперимента мышь усыпляют, не просыпаясь. Следовательно, достаточно дезинфекции кожи и инструментов этанолом. Однако, в зависимости от рекомендаций учреждения или от того, будет ли процедура длиться дольше, следует использовать более полные методы дезинфекции, такие как три чередующихся скраба с бетадином/повидоном и спиртом.

2. Установите катетер в яремную вену.

ПРИМЕЧАНИЕ: Важно по возможности избегать микробного загрязнения во время операции. Позаботьтесь о том, чтобы тщательно продезинфицировать кожу 70% этанолом (EtOH) перед началом операции. Всегда используйте стерилизованные ножницы и пинцет и регулярно промывайте их до 70% EtOH. Работайте в чистом месте и носите маску для лица. Для внутривенного введения используется катетер «над иглой» массой 22 г, состоящий из иглы внутри пластиковой трубки (см. Таблицу материалов).

1. Положите мышь на спину и зафиксируйте передние ноги хирургическим скотчем, чтобы растянуть горло (рисунок 1А). Продезинфицируйте горло 70% этанолом.<бр/> заметка: Для удобства перед операцией можно побрить горло. Если процедура длится дольше, необходимо провести тщательное бритье для правильной асептической техники.
2. Сделайте разрез 0,7-1 см над правой или левой яремной веной с помощью стерильных ножниц. Растяните прилегающую соединительную ткань, чтобы обнажить наружную яремную вену и верхнюю часть грудной мышцы (рисунок 1A).
3. Заполните катетер теплым стерильным физиологическим раствором. Введите катетер в вену после проникновения через грудную мышцу (рис. 1B).
   заметка: Следите за тем, чтобы внутри катетера не было пузырьков воздуха. Важно ввести катетер через мышцу, чтобы предотвратить кровоизлияние, так как мышца образует точку сжатия. Даже мыши с дефектами гемостаза, такие как мыши Itgb3-/-, не кровоточат при введении катетера при таком подходе.
4. Аккуратно извлеките иглу и при необходимости осторожно переместите катетер вглубь вены. Подсоедините шприц и стабилизируйте катетер, добавив каплю хирургического клея (Таблица материалов).
   заметка: Катетер можно ввести внутрь хвостовой вены, хотя это требует некоторой практики, потому что вена имеет меньший калибр. Особенно сложно это сделать при использовании мышей с темной шерстью, у которых едва заметна хвостовая вена. Благодаря большему калибру, расположение катетера внутри яремной вены может позволить более надежно вводить большие объемы или повторять процедуры. Обратите внимание, что шприц в первое время наполнен теплым физиологическим раствором, и не забывайте вводить мертвый объем перед введением раствора препарата.
5. Осторожно верните мышь в положение лежа (рисунок 1С). Нанесите гель (Table of Materials) на глаза, чтобы предотвратить сухость.

Результаты

Рисунок 1: Введение катетера. (А) Делается разрез для обнажения яремной вены и верхней части грудной мышцы. (B) Катетер, заполненный физиологическим раствором, вводится в яремную вену, проходя через мышцу, создавая точку компрессии. (C) Мышь осторожно поворачивается так, чтобы она лежала вентральной поверхностью вниз с правильно расп...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Гистоакрил 5 x 0, 5 мл	Браун	1050052	Инъекционный раствор хирургического клея
Ималген/Кетамин 1000 жид/10 мл	Беринг	3661103003199.00 (Английский	Защита глаз
Ромпун Ксилазин 2% жидкий/25 мл	Байер	4007221032311.00
Катетер Surflo для внутривенных вливаний - Blue 22 G	Терумо	СР-OX2225C1