$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Хирургия и установка черепного кольца
ПРИМЕЧАНИЕ: Полная поддержка для установки мыши состоит из 4 частей: блока и пластины, кольца для удержания головки мыши и винта для крепления кольца к блоку (Рисунок 1A). Все элементы поддержки были получены из i.materialise.com с помощью 3D-печати. Пластина изготовлена из полимера акрилонитрилбутадиенстирола (ABS), блок и винт из нержавеющей стали, а кольцо из высококачественной нержавеющей стали (высокодетализированная нержавеющая сталь) (см. Рисунок 2 для размеров и материалов для файлов 3D-печати). Блок неподвижно фиксируется на опоре либо привинчивается, либо приклеивается. После того, как кольцо закреплено на черепе мыши, его следует прикрутить к держателю блока (рисунок 1A).
- Смочите волосы на коже головы бумажным полотенцем, смоченным 70% этанолом для дезинфекции. Удалите все выпавшие волосы влажным бумажным полотенцем.
заметка: Для удобства кожу головы можно сбрить перед операцией.
- Надрезать волосистую часть головы, сформировав Т-образный знак по средней линии до 1 см и между ушами, обнажить кальварию с помощью стерильных тонких ножниц и пинцета.
заметка: Кольцо будет расположено так, чтобы перекрывать лобную и теменную кости (Рисунок 1B).
- Используйте стерильный пинцет, чтобы обнажить череп. Аккуратно удалите надкостницу ножницами и пинцетом. Используйте стерильный ватный тампон, смоченный физиологическим раствором, чтобы удалить всю надкостницу и любой мусор или волосы, которые могут изменить изображение><.
заметка: Чтобы ограничить воспалительные реакции, будьте очень осторожны, чтобы не повредить кость.
- Удалите любые следы крови, промыв солевым раствором, и быстро высушите кость сухим ватным тампоном. Нанесите клей-гель на кольцо, расположите его на обнаженной кости и удерживайте в течение нескольких секунд, чтобы кольцо было прочно прикреплено к черепу><.
заметка: Клей не должен попадать в поле наблюдения, так как это может привести к нежелательной автофлуоресценции.
- Слегка смочите череп ватным тампоном, смоченным в физиологическом растворе.
- Приготовьте силиконовую зубную пасту, тщательно смешав синие и желтые компоненты в соотношении 1:1. Нанесите зубную пасту по всему периметру кольца для герметизации, чтобы предотвратить утечку во время визуализации. Осторожно удалите зубную пасту или клей, которые могли попасть в кольцо.
- Заполните кольцо физиологическим раствором и проверьте на герметичность.
заметка: Физиологический раствор служит в качестве иммерсионной среды для объектива микроскопа. Кровотечение может быть более критичным при использовании мышей с дефектами, связанными с гемостазом. Важно не допускать попадания крови в кольцо, так как это может привести к размытию дальнейшей визуализации.
- Поместите мышь на опору и прикрутите кольцо к держателю блока (рисунок 1С). Подложите сложенные компрессы под голову животного, чтобы приподнять голову и предотвратить отслоение кольца от черепа.
заметка: Голова закреплена непосредственно так, что предотвращает смещение изображения из-за дыхания.
- Поместите опору и мышь в сборе в нагретую камеру микроскопа (рис. 1D).
ПРИМЕЧАНИЕ: Будьте осторожны, чтобы ни в коем случае не сместить введенный катетер.
