Установка окна прижизненной визуализации поджелудочной железы в мышиной модели: интегрированное окно визуализации поджелудочной железы для покадровой съемки микроструктуры поджелудочной железы мышей in vivo

Аннотация

Источник: Park, I. et. al. Стабилизированная продольная визуализация поджелудочной железы на клеточном уровне in vivo в мышиной модели с помощью окна прижизненной визуализации поджелудочной железы. J. Vis. Exp. (2021)

Это видео демонстрирует процедуру имплантации окна визуализации поджелудочной железы для отделения поджелудочной железы от кишечника для продольной покадровой визуализации микроструктуры поджелудочной железы с высоким разрешением.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Хирургия

1. Подготовьте стерильную хирургическую платформу и простерилизуйте поверхности с помощью 70% этанола.
   заметка: Для сеансов продольной визуализации необходим асептический метод.
2. Обезболить мышей смесью тилетамин/золазепам (30 мг/кг) и ксилазин (10 мг/кг).
   заметка: Использование тилетамина/золазепама рекомендуется вместо кетамина из-за его побочного эффекта гипергликемии. Для цели эксперимента следует подбирать оптимальную анестезию.
3. Контролируйте температуру тела с помощью ректального зонда с грелкой, управляемой гомеотермией.
4. Побрейте левый бок мыши и нанесите три раунда чередования скраба на основе спирта и йода><. заметка: Если используется крем для депиляции, не оставляйте дольше 1 минуты, чтобы избежать химического ожога.
5. Сделайте разрез 1,5 см на левом боку мыши и рассеките кожу и мышцы.
6. Выполните кисетное шво с черным или нейлоновым швом 4-0 в краю разреза.
7. Используйте микроретрактор на разрезе и аккуратно обнажите селезенку.
8. Осторожно объедините селезенку кольцевыми щипцами и определите поджелудочную железу.
9. Поместите окно на бок мыши и пропустите селезенку и поджелудочную железу через открытое пространство окна. Манипуляции с поджелудочной железой должны быть очень осторожными, так как это может вызвать кровотечение или панкреатит.
   заметка: Индивидуальная разработка прижизненного окна визуализации поджелудочной железы для изоляции поджелудочной железы от кишечника в брюшной полости (рис. 1A, B).
10. Аккуратно поместите поджелудочную железу на пластину окна визуализации; селезенка будет размещена на открытом пространстве окна.
11. Нанесите капли N-бутилцианоакрилатного клея на край окна визуализации.
    1. Чтобы свести к минимуму количество наносимого клея, используйте для аппликации иглу для катетера 31 G. Если количество капли большое, то ткань непреднамеренно прилипнет к окну или покровному стеклу.
12. Аккуратно приложите круглое защитное стекло диаметром 12 мм к краю окна изображения.
13. Потяните за шовную петлю, чтобы она поместилась в боковой паз окна и завяжите ее три раза.
14. Разрежьте максимальный проксимальный участок узла, чтобы предотвратить прерывание тугих швов, когда мыши бодрствуют.
15. Дайте мышам восстановиться после анестезии (2-3 часа) и введите кетопрофен (5 мг/кг, подкожно в рыхлую кожу у основания шеи или бедра животного) для облегчения боли. Повторно оценивайте признаки боли каждые 12 часов><, а кетопрофен следует рассматривать каждые 24 часа в течение 1-3 дней. заметка: Анальгезия влияет на секрецию инсулина в ответ на глюкозу. Выбор и время проведения анальгезии должны быть индивидуальными в соответствии с экспериментальной целью.
16. Разместите мышь в клетке с достаточной подстилкой, чтобы избежать контакта окна с клеткой. Избегайте содержания мышей в доме без оконной хирургии.

Результаты

Рисунок 1. Дизайн и фотография окна прижизненной визуализации поджелудочной железы. (A) 3D и поперечный вид окна прижизненной визуализации поджелудочной железы. (B) Передняя и задняя фотография окна для визуализации поджелудочной железы.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Чехолы круглые	Мариенфельд	111520 Номер 111520	Защитное стекло для окна для визуализации поджелудочной железы
Ножницы IRIS	ЧОНДО БИО & ПЛАНТ КО, ЛТД	С-1107-10	Данный товар может быть заменен на товар другой компании
Локтит 401	Компания Henkel	401	N-бутилцианоакрилатный клей
Микро иглодержатель	ЧОНДО БИО & ПЛАНТ КО, ЛТД	Н-1126-10	Данный товар может быть заменен на товар другой компании
Микроретрактор	ЧОНДО БИО & ПЛАНТ КО, ЛТД	17004-03	Данный товар может быть заменен на товар другой компании
Микрощипцы	ЧОНДО БИО & ПЛАНТ КО, ЛТД	Ф-1034	Данный товар может быть заменен на товар другой компании
Нейлон 4-0	ЭЙЛИ	НБ434	Нерассасывающийся шовный материал
Omnican N 100 30G	Б БРАУН	FT9172220S	Для сосудистого катетера используйте только игольчатую часть
Окно визуализации поджелудочной железы	Геумто Инжиниринг	Индивидуальный заказ	Окно визуализации поджелудочной железы - индивидуальный заказ
Физиолюкс	Кент Сайентифик	ПС-02	Гомеотермический регулятор температуры
Кольцевые щипцы	ЧОНДО БИО & ПЛАНТ КО, ЛТД	Ф-1090-3	Данный товар может быть заменен на товар другой компании
Ромпун	Байер	Ромпун	Обезболивающее средство
Золетил	Вирбак	Золетил 100	Обезболивающее средство
BALB/C Нюд	ОриентБио	BALB/C Нюд	BALB/C Нюд

гг.