Извлечение чашечки сетчатки у мыши: хирургическая процедура для получения неповрежденной чашечки сетчатки из глаза мыши

Аннотация

Источник: Jiang, K. et al. Определение митохондриального дыхания и гликолиза в образцах ткани сетчатки ex vivo. J. vis. Exp (2021)

В этом видео описывается протокол изоляции чашечки сетчатки без внешних покрывающих слоев от глазного яблока мыши. Извлеченная ткань сетчатки может помочь в изучении различных метаболических путей, происходящих в клетках сетчатки.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Рассечение чашечки сетчатки

1. Усыпить мышь с помощью асфиксии CO₂ в соответствии с институциональными рекомендациями по эвтаназии.
   заметка: Не оставляйте животное в камере с_СО2 дольше, чем время, необходимое для эвтаназии.
2. Энуклеируйте глаза и поместите в ледяной буфер 1x PBS в чашке Петри, а затем поместите его под микроскоп для вскрытия.
3. Аккуратно удалите, разрезав микроножницами, лишние прямые мышцы, прикрепленные снаружи глазного яблока, и отрежьте зрительный нерв.
4. С помощью иглы 30 G проделайте отверстие на краю роговицы (лимба), которое служит местом введения микроножниц. Затем с помощью микроножниц для тонкого препарирования сделайте круговой надрез по краю роговицы, отделяя ее от заднего наглазника.
5. Используйте острые щипцы для рассечения, чтобы удалить роговицу, хрусталик и стекловидное тело подальше от наглазника.
6. С помощью тонких диссекционных микроножниц сделайте несколько небольших надрезов на склеральном слое у края наглазника. Избегайте порезов слоя сетчатки. С помощью двух острых щипцов для рассечения удерживайте склеральную ткань с каждой стороны разреза и очень осторожно потяните за склеральный слой, чтобы удалить его из нервной сетчатки. Повторяйте это вокруг наглазника, пока не будут удалены все склеры и не получится неповрежденная чашечка сетчатки.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
1X PBS	Термо Фишер	14190-144
Игла 30 калибра	Прецизионное скольжение BD	305106
Дырокол для биопсии, 1 мм	Интегра Милтекс	33-31АА
Камера удушения СО2
Щипцы для рассечения-Dumont #5	Инструменты для точной науки	11251-10	Прямой наконечник
Щипцы для рассечения-Dumont #7	Инструменты для точной науки	11274-20	Изогнутый наконечник
Диссекционный микроскоп
Щипцы Грефе	Инструменты для точной науки	11051-10	Изогнутый, зубчатый наконечник
Микроножницы	Инструменты для точной науки	15004-08	Изогнутый наконечник

гг.