Апикальная резекция неонатальной мышиной модели: хирургическая процедура ампутации верхушки желудочка для изучения регенеративного потенциала в сердце новорожденной мыши

Аннотация

Источник: Li, Y. et al. Трансплантация сердечных макрофагов новорожденных мышей взрослым мышам. J. Vis. Exp. (2021).

В этом видео мы демонстрируем процедуру хирургического удаления верхушки левого желудочка сердца неонатальной мыши.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Операция апикальной резекции у новорожденной мыши Cx3cr1 ^GFP/+ 1-дневной давности (фон C57BL/6)

1. анестезия
   1. Выньте всех мышиных детенышей из клеток и поместите их в чистую сухую коробку.
   2. Погрузите каждую мышь в лед примерно на 2-3 минуты. Убедитесь, что между льдом и детенышем мыши есть тонкий барьер, такой как латекс или марля, чтобы предотвратить обморожение.
   3. Определите достаточную анестезию, наблюдая за следующими признаками: бледность кожи, отсутствие движения конечностей и отсутствие педального рефлекса.
2. Торакотомии
   1. Предварительно охладите бронзовую операционную платформу в течение ночи до -20 °C, чтобы сохранить анестезию.
   2. Достаньте мышь под наркозом из холодильника и поставьте ее на бронзовую операционную платформу. Закрепите мышь на операционной платформе в лежачем положении с помощью медицинской клейкой ленты.
   3. Положите операционную платформу с находящейся на ней мышкой под стереоскоп.
   4. Продезинфицируйте мышиную грудную клетку с помощью подготовительной салфетки, пропитанной бетадином и 70% спиртом, или в соответствии с политикой учреждения.
   5. Надрежьте кожу разрезом 1 см в четвертой межреберье грудной полости, а затем отделите межреберные мышцы с помощью микрохирургических ножниц до тех пор, пока не будет получен доступ к сердцу.
   6. Поочередно надавливайте на грудную клетку и живот с помощью двух щипцов до тех пор, пока сердце не выйдет наружу из грудной клетки без каких-либо механических повреждений.
   7. Установите ребра ниже и выше небольшого разреза в качестве естественной фиксации для обездвиживания сердца.
3. Резекция верхушки желудочка
   1. Найдите верхушку левого желудочка. Отрежьте ткань верхушки желудочка диаметром 1 мм с помощью иридэктомических ножниц под стереоскопом.
   2. Убедитесь, что камера левого желудочка обнажена, и начните сочиться.
   3. Аккуратно прижмите сердце обратно к грудной полости с помощью ватного тампона.
   4. Сшиваем мышцы, ребра и кожу с помощью 8-0 Проленовые швы.
   5. Тщательно очистите мышь после операции.
4. Послеоперационный уход
   1. Перенесите мышь с рабочей платформы на нагревательное одеяло с температурой 37 °C, чтобы согреть тело сразу после операции.
   2. Подтвердить анабиоз мыши, наблюдая за следующими признаками: восстановление спонтанного дыхания, изменение цвета кожи с бледного на розовый, а также движение конечностей.
   3. Отнесите прооперированную мышь обратно к матери, как только она восстановится.
   4. При необходимости смешайте управляемую мышь с материалами для гнезда ее матери.
      заметка: Важно забрать у матери всех 1-дневных щенков сразу, а затем вернуть их всех сразу после того, как все щенки будут восстановлены.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Набор для диссоциации сердца у новорожденных	Miltenyi Bio Tech, Тетеров, Германия	130-098-373