Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Хирургическое разрушение лимфатических сосудов хвоста мыши
- Используйте восьминедельных мышей C57BL/6 с равным гендерным распределением.
- Поместите мышь под общую анестезию в индукционную камеру с 3-4% изофлураном в 100% кислороде с последующей поддерживающей седацией в 1-3% во время процедуры.
- Введите 0,5 мг/кг бупренорфина с пролонгированным высвобождением (SR) подкожно для контроля боли.
заметка: Дополнительные обезболивающие препараты, вводимые после операции: Карпрофен один раз в 24 ч в течение не менее 48 ч и Бупивакаин один раз после разреза или до закрытия разреза, наносятся капельно на края кожи (длится до 4 – 6 ч).
- Расположите мышь дорсально и подготовьте хвост 70% изопропиловым спиртом.
- Перед процедурой измерьте диаметр хвоста с шагом 5 мм, начиная с 20 мм от основания хвоста, с помощью штангенциркуля. Эти измерения будут использоваться для расчета объема с помощью уравнения усеченного конуса.
- Отметьте разрез по окружности 3 мм на хвосте в 20 мм от основания.
- Выполните тщательное иссечение кожи на всю толщину с помощью стерильного хирургического лезвия (размер 15), оставив всю подлежащую сосудистую сеть нетронутой под хирургическим микроскопическим увеличением. Надрежьте верхнюю окружную отметину (20 мм от основания хвоста) сначала через дерму, а затем сделайте круговой разрез на всю толщину на расстоянии 3 мм дистальнее первого разреза
- Сделайте перпендикулярный вертикальный надрез на всю толщину, чтобы соединить два разреза. Используйте зубчатый тонкий звукосниматель, чтобы ухватиться за передний край, и с помощью микроножниц осторожно рассеките глубоко внутри аваскулярной плоскости до дермы и поверхностно до вены адвентиции.
- Введите 0,1 мл изосульфана синего (1%) подкожно проксимальнее кончика хвоста.
- Определите два лимфатических канала, примыкающих к боковым хвостовым венам, под операционным микроскопом. Лимфатические сосуды будут казаться синими из-за инъекции изосульфана. Пересеките лимфатические сосуды с помощью прямых микрохирургических ножниц. С помощью ножниц аккуратно рассеките плоскость между боковой веной и лимфатической линами. Затем проведите кончик одного лезвия ножниц между лимфатическим сосудом и боковой веной и закройте лезвия, чтобы пересечь лимфатический сосуд.
- Перевяжите рану хвоста стерильной адгезивной прозрачной повязкой. Ежедневно проверяйте послеоперационные разрезы, чтобы убедиться, что они не инфицированы и не кровоточат, и обеспечить уход за раной в течение 2 недель.
- Размещайте животных поодиночке, чтобы предотвратить дальнейшее повреждение хвоста и предотвратить укусы животных, которые могли бы привести к хирургическим осложнениям.
