Позиционирование лазерного допплеровского зонда: техника имплантации зонда над средней мозговой артерией для измерения кровотока на мышиной модели

Аннотация

Источник: Llovera, G., et al. Моделирование инсульта у мышей: транзиторная окклюзия средней мозговой артерии через наружную сонную артерию. J. Vis. Exp. (2021).

Это видео описывает хирургическую процедуру иммобилизации лазерного допплеровского зонда над средней мозговой артерией мышиного мозга, или MCA. Зонд помогает измерить кровоток в микроциркуляторном русле мозга, измеряя допплеровский сдвиг, вызванный движением красных кровяных телец в артерии.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Подготовка и позиционирование лазерного допплера

1. Подготовьте держатель для лазерного доплеровского зонда, отрезав кончик наконечника пипетки объемом 10 мкл (длина 3-5 мм).
   заметка: Все инструменты стерилизуются с помощью стерилизатора горячих шариков. Поверхности также дезинфицируются до и после операции с помощью микробного дезинфицирующего спрея. Перед операцией области вокруг головы и грудной клетки мышей дезинфицируются спреем для дезинфекции ран.
2. За 30 минут до операции мышке введут анальгезию (4 мг/кг карпрофена и 0,1 мг/кг бупренорфина, внутрибрюшинно).
3. Обезболите мышь, поместив ее в индукционную камеру со скоростью потока изофлурана 4% до прекращения спонтанного движения тела и вибрисс.
4. Поместите мышь в положение лежа в зоне операции так, чтобы ее нос находился в маске для анестезии. Поддерживайте концентрацию изофлурана на уровне 4% еще минуту, затем уменьшите ее и держите на уровне 2%.
5. Установите соответствующую грелку с обратной связью для поддержания температуры тела мыши на уровне 37 °C и аккуратно введите ректальный зонд, чтобы контролировать температуру на протяжении всей хирургической процедуры.
6. Нанесите глазную мазь с декспантенолом на оба глаза.
7. Продезинфицируйте кожу и волосы вокруг левого глаза и уха с помощью 70% этанола.
8. Разрежьте кожу головы между левым ухом и глазом (длиной 1 см), чтобы обнажить кость черепа.
9. Разрежьте и отстраните височную мышцу, чтобы визуализировать MCA под черепом.
10. Зафиксируйте клеем внешнюю часть наконечника, удерживающего лазерный доплеровский зонд/волокно поверх левого MCA. Затем приклейте кожу, чтобы закрыть рану вокруг держателя наконечника. Нанесите 2-3 капли отвердителя клея, чтобы ускорить процесс. Убедитесь, что лазерное доплеровское волокно не приклеено и в любой момент может быть легко снято с держателя наконечника.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Пандус 45°	H&S Kunststofftechnik		Высота: 18 см
Шприц 5 мл	Браун
Система анестезии для изофлурана	Драгер
Помада из бепантена	Байер
Мыши C57Bl/6J	Чарльз Ривер	000664
Этанол 70%	CLN Chemikalien Laborbedorf	521005
Этанол 96%	CLN Chemikalien Laborbedorf	522078
Этанол 99%	CLN Chemikalien Laborbedorf	ЭТО-5000-99-1
Нитей	Доккол	602112ПК5Рэ
Тонкие щипцы под углом 45	ФСТ	11251-35
Тонкие щипцы	ФСТ	11252-23
Тонкие ножницы	ФСТ	14094-11
клей	Орехсельн	БСИ-112
Клей-отвердитель	Drechseln & Mehr	БСИ-151
Одеяло с подогревом	Регулятор температуры постоянного тока FHC
Изофлуран	аббат	В506
Лазерный допплер	Перимед	PF 5010 LDPM, система Periflux 5000
Лазерный доплеровский зонд	Перимед	91-00123 (Английский

гг. )