$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Подготовка материала и инструментов
- Подсоедините тепловое одеяло, чтобы поддерживать температуру операционной зоны и температуру тела мыши во время анестезии на уровне 37 °C.
- Автоклавные ножницы и щипцы, приготовьте 70% раствор этанола и держите в наличии декспантеноловую глазную мазь, несколько кусочков ваты и 5-0 покрытых плетеных полиэфирных шовных материалов готовыми к применению. Приготовьте шприц объемом 1 мл с 0,9% физиологическим раствором (без иглы), чтобы сохранить место разреза животного увлажненным. Приготовьте анестезиологический газ (100%О2 + изофлуран).
- Подготовьте держатель для лазерного доплеровского зонда, разрезав кончик наконечника пипетки объемом 10 мкл (длина 3-5 мм).|
ПРИМЕЧАНИЕ: Все инструменты стерилизуются с помощью стерилизатора с горячими шариками. Поверхности также дезинфицируются до и после операции с помощью микробного дезинфицирующего спрея. Перед операцией области вокруг головы и грудной клетки мышей дезинфицируются спреем для дезинфекции ран.
2. Подготовка лазерного допплера
- За 30 минут до операции мышке введут анальгезию (4 мг/кг карпрофена и 0,1 мг/кг бупренорфина, внутрибрюшинно).
- Обезболите мышь, поместив ее в индукционную камеру со скоростью потока изофлурана 4% до прекращения спонтанного движения тела и вибрисс.
- Поместите мышь в положение лежа в зоне операции так, чтобы ее нос находился в маске для анестезии. Поддерживайте концентрацию изофлурана на уровне 4% еще минуту, затем уменьшите ее и держите на уровне 2%.
- Установите соответствующую грелку с обратной связью для поддержания температуры тела мыши на уровне 37 °C и аккуратно введите ректальный зонд, чтобы контролировать температуру на протяжении всей хирургической процедуры.
- Нанесите глазную мазь с декспантенолом на оба глаза.
- Продезинфицируйте кожу и волосы вокруг левого глаза и уха с помощью 70% этанола.
- Разрежьте кожу головы между левым ухом и глазом (длиной 1 см), чтобы обнажить кость черепа.
- Разрежьте и отстраните височную мышцу, чтобы визуализировать MCA под черепом.
- Зафиксируйте клеем внешнюю часть наконечника, удерживающего лазерный доплеровский зонд/волокно поверх левого MCA. Затем приклейте кожу, чтобы закрыть рану вокруг держателя наконечника. Нанесите 2-3 капли отвердителя клея, чтобы ускорить процесс. Убедитесь, что лазерное доплеровское волокно не приклеено и в любой момент может быть легко снято с держателя наконечника.
3.Модель Transient MCAo (окклюзия)
- Поверните мышь в положение лежа на спине. Вставьте рыло в обезболивающий конус и зафиксируйте лапы скотчем.
- Продезинфицируйте кожу и волосы вокруг груди и сделайте разрез по средней линии на шее длиной 2 см.
- С помощью щипцов раздвиньте кожу и подчелюстные железы. Используйте ретракторы, чтобы удерживать грудино-сосцевидную мышцу, обнажить операционное поле и найти левую общую сонную артерию (ЛСА). Рассеките ОСА без соединительной ткани и окружающих нервов (без повреждения блуждающего нерва) и выполните временное лигирование перед бифуркацией.
- Рассеките наружную сонную артерию (ЭКА) и завяжите постоянный узел в самой дистальной видимой части. Наложите еще один шов под ЭКА, ближе к раздвоению, и подготовьте свободный узел, который будет использован позже.
- Рассеките внутреннюю сонную артерию (ВСА) и наложите на нее микрососудистый зажим на 5 мм над бифуркацией. Следите за тем, чтобы не повредить блуждающий нерв.
- Прорежьте небольшое отверстие в ЭХА между тугой и ослабленной лигацией; будьте осторожны, чтобы не разрезать всю ЭХА.
- Введите нить накала и продвигайте ее к CCA. Затяните рыхлую лигацию в ECA вокруг просвета, чтобы быстро закрепить нить в этом положении и избежать кровотечения при удалении микрососудистого зажима.
- Снимите микрососудистый зажим и введите нить через ВСА до тех пор, пока не будет достигнуто происхождение МКА путем обнаружения резкого снижения (>80%) мозгового кровотока по мере измерения с помощью лазерной допплерографии. Зафиксируйте нить в этом положении, дополнительно затянув узел вокруг ECA.
заметка: Когда нить идет в нужном направлении, она продвигается плавно, и никакого сопротивления наблюдать не должно.
- Запись значений лазерного допплера до и после введения нити накала.
- Удалите ретрактор и переместите грудино-сосцевидную мышцу и подчелюстные железы перед наложением швов на рану. Снимите лазерный допплеровский зонд и поместите животное в камеру восстановления при температуре 37 °C на 1 час (до удаления нити).