$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Колоноскопия и индукция раны
- Предварительно соберите компоненты эндоскопа, сначала вставив эндоскоп с жестким отверстием 1,9 мм в тубус (рис. 1A-B). Прикрепите воздушный насос (для обеспечения инсуффляции толстой кишки) с помощью прилагаемой трубки к газовому клапану с левой стороны оболочки рядом с рабочим каналом (рис. 1C).
заметка: Несмотря на то, что описанный здесь объектив имеет угол 0°, для этой цели также можно использовать объектив 30°.
- Убедитесь, что рабочий канал находится в открытом положении и введите 3 Fr-биопсийных щипца через рабочий канал и продвигайте его до конца тубуса (при этом следя за тем, чтобы он не выступал из тубуса) (рисунок 1С). Прикрепите собранный эндоскоп к источнику света и устройству видеосъемки в соответствии с инструкциями производителя.
- Обезболите мышь 5% изофлураном с кислородом в индукционной камере. Затем переместите мышь на эндоскопическую платформу, содержащую систему нагрева (для предотвращения гипотермии) на ее вентральной стороне, и поддерживайте под анестезией с помощью носового конуса с 2% изофлураном с кислородом. Добавьте ветеринарную мазь в глаза, чтобы предотвратить сухость во время пребывания под анестезией. Убедитесь, что мышь полностью обезболивается, осторожно сжав заднюю лапку, чтобы проверить рефлекс><.
заметка: С помощью этой техники можно использовать мышей любой штамм или любой пол; Тем не менее, предпочтительно, чтобы мыши были в возрасте не менее 8 недель, чтобы они были достаточно крупными для проведения процедуры.
- Добавьте ветеринарную мазь в глаза, чтобы предотвратить сухость во время пребывания под анестезией.
- Убедитесь, что мышь полностью обезболивается, осторожно сжав заднюю лапку, чтобы проверить рефлекс.
- Наполните шприц объемом 3 мл с прикрепленной иглой для зонда крысы фосфатно-солевым буфером (PBS) комнатной температуры. Введите иглу примерно на 1 см в анальное отверстие мыши и аккуратно введите PBS для выведения фекального материала. Несколько фекальных гранул должны выйти из мыши вместе с ПБС, которая была введена.
заметка: Закапывание чрезмерного объема PBS может привести к образованию пены в просвете, которая может затруднить видимость просвета.
- Вставьте собранный эндоскоп на 0,5 см в анальное отверстие мыши. Продвигайте биопсийные щипцы в просвет прямой кишки до тех пор, пока полные «челюсти» (включая шарнир) щипцов не окажутся за пределами тубуса (как видно на видеомониторе). Поверните щипцы на 90° так, чтобы челюсти открылись в ориентации восток-запад.
- Для проведения биопсии раскройте щипцы и продвинуться примерно на 1 см, закройте щипцы и одним плавным движением быстро оттяните щипцы назад, оставив их закрытыми.
- Избегайте полной инсуффляции толстой кишки при проведении биопсии. Поэтому оставьте правую сторону газового клапана открытой на этом этапе; Хотя следует учесть, что при вскрытии щипцов есть риск повредить слизистую, когда толстая кишка находится в таком положении.
