$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Забор раневого ложа для молекулярного анализа
- Усыпьте мышь с помощью асфиксии CO2 с последующим вывихом шейки матки (или эквивалентной техникой) в выбранный день после биопсии.
- Соберите дистальный отдел толстой кишки, открыв кожу и мышцы живота, чтобы обнажить полость тела. Поместите закрытые ножницы под толстую кишку и осторожно приподнимите, чтобы освободить ее от подлежащей брыжейки, а затем разрежьте толстую кишку посередине и в анальном отверстии, чтобы удалить ее от мыши.
- Промойте содержимое кала с помощью иглы для зонда крыс, прикрепленной к шприцу объемом 20 мл, наполненному ледяным 1x PBS, затем положите толстую кишку на фильтровальную бумагу.
- Разрежьте толстую кишку в продольном направлении на фильтровальной бумаге, следя за тем, чтобы брыжеечная сторона была обращена вниз к фильтровальной бумаге. Нанесите 0,2% метиленового синего на слизистую оболочку с помощью отжимной пипетки, пока ткань еще находится на фильтровальной бумаге, а затем слейте излишки метиленового синего. Осмотрите толстую кишку под рассекающим микроскопом и найдите раневое ложе (рисунок 1A).
- Используя 4-дюймовые ножницы для микрорадужной оболочки, разрежьте по краю раневого ложа (рис. 1А, пунктирный круг), стараясь не врезаться в мышечный слой (если мышца не желательна) и перенесите рассеченное раневое ложе в трубку с помощью тонкого пинцета для мгновенной заморозки или желаемого метода хранения.
заметка: Количество собранной таким образом ткани достаточно для извлечения РНК для РНК-секвенирования или эквивалентного анализа.
