$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Генерация петли подвздошной кишки
- Подготовка кожи: Потрите шерсть средней линии живота спиртовыми тампонами или марлевой губкой, смоченной в 70% этаноле. Не смачивайте широкий участок шерсти спиртом, чтобы не допустить переохлаждения.
- С помощью ножниц проведите лапаротомию по средней линии. Сделайте вертикальный разрез посередине живота (около 2 см в длину) и обнажите брюшину. Будьте осторожны, чтобы не травмировать внутрибрюшные органы.
- Положите предварительно разрезанную влажную ватную марлю на оголенную внутрибрюшную полость.
- Используйте влажные ватные палочки для мобилизации и экстериоризации слепой кишки. Аккуратно положите слепую кишку на влажную ватную марлю. <бр/>
заметка: Слепая кишка локализуется в левом каудальном квадранте брюшной полости у большинства мышей независимо от пола животного.
- С помощью влажных ватных палочек мобилизуйте и аккуратно вытяните наружу подвздошную кишку, концевая часть которой (дистальный конец) прикреплена к слепой кишке (рис. 1B).
- Разверните не менее 6 см терминального отдела подвздошной кишки на влажную ватную марлю без нарушения брыжеечных сосудов и кровоснабжения. Кровоснабжение сохраняется, если нет кровотечения, а ткань сохраняет свой розовый цвет (рис. 1В).
заметка: Избегайте высыхания открытых тканей, поддерживая ткани во влажном состоянии все время с помощью теплого HBSS (каждые 2 - 3 минуты) с помощью шприца объемом 10 мл, предварительно прикрепленного к желтой питательной трубке.
- Рядом с слепой кишкой определите главную артерию в брыжейке, снабжающую кровью подвздошную кишку. Затем найдите два участка лигирования в брыжейке, которые свободны от критических кровеносных сосудов.
- С помощью тупых тканевых щипцов крепко захватите терминальный отдел подвздошной кишки (ближайший к слепой кишке) и с помощью щипцов с тонким кончиком фенестрируйте брыжейку, избегая кровеносных сосудов. Наложите шелковый шов на перфорацию и завяжите хирургический узел, чтобы создать первую лигацию (дистальный конец петли).
- С помощью линейки отмерьте расстояние 4 см от первой лигатуры и создайте вторую лигатуру (проксимальный конец петли), как указано в шаге 2.8 (рисунок 1C).
- Тонкими ножницами аккуратно разрежьте рядом с каждой лигацией, чтобы изолировать 4-сантиметровую петлю подвздошной кишки, сохраняя неповрежденное кровоснабжение и брыжеечную оболочку.
заметка: Отрежьте оба конца наружного сегмента iLoop, затем аккуратно промойте в качестве необходимого шага, который предотвращает интерференцию с содержимым люмината (фекальными массами), тем самым способствуя равномерному рассеиванию FITC-декстрана или хемотаксических стимулов по всей длине изолированного сегмента, а также обеспечивая более точное количественное определение лейкоцитов с помощью проточной цитометрии. Эта процедура также обеспечивает равномерное растяжение слизистой оболочки после введения заданных объемов реагента и лучшую воспроизводимость между животными.
- Аккуратно промойте содержимое сегмента подвздошной петли теплым HBSS с помощью гибкой желтой питательной трубки, прикрепленной к шприцу объемом 10 мл.
- Перевязать два срезанных конца промытой подвздошной петли с помощью шелкового шва.
- С помощью шприца объемом 1 мл с иглой 30 г медленно введите в просвет кишечника 250 мкл реагента, такого как ФИТК-декстран или хемокин. Подвздошная петля будет раздуваться, вызывая умеренное растяжение слизистой оболочки (Рисунок 1D).
заметка: Введите реагент в петлевой просвет на противоположной стороне брыжеечной артерии. Будьте осторожны, чтобы не вырвать подвздошную петлю у животного во время инъекции, чтобы избежать разрыва кровеносных сосудов и вызвать кровотечение.
- С помощью влажных ватных палочек аккуратно положите обратно подвздошную петлю, проксимальный отдел подвздошной кишки и слепую кишку.
- Используйте иглодержатель, анатомические щипцы и нерассасывающиеся шелковые шовные материалы 3.0 с иглой обратной резки для закрытия брюшной стенки.
- Поместите животное в анестезиологическую камеру с регулируемой температурой на период инкубации.
