$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Генерация петли проксимального отдела толстой кишки (pcLoop)
- Подготовка кожи: Потрите шерсть средней линии живота спиртовыми тампонами или марлевой губкой, смоченной в 70% этаноле. Не смачивайте широкий участок шерсти спиртом, чтобы не допустить переохлаждения.
- С помощью ножниц проведите лапаротомию по средней линии. Сделайте вертикальный разрез посередине живота (около 2 см в длину) и обнажите брюшину. Будьте осторожны, чтобы не травмировать внутрибрюшные органы.
- Положите предварительно разрезанную влажную ватную марлю на оголенную внутрибрюшную полость.
- Используйте влажные ватные палочки для мобилизации и экстериоризации слепой кишки. Аккуратно положите слепую кишку на влажную ватную марлю.
заметка: Слепая кишка локализуется в левом каудальном квадранте брюшной полости у большинства мышей независимо от пола животного.
- С помощью влажных ватных палочек обработайте снаружи всю подвздошную кишку и положите ее поверх влажной ватной марли. Определите проксимальный отдел ободочной кишки и кровоснабжение, расположенное в мезоколоне. Мобилизуйте проксимальный отдел ободочной кишки и с помощью щипцов с тонким кончиком создайте первую лигатуру в свободной от сосудов области мезоколона, расположенной на расстоянии около 0,5 см дистальнее слепой кишки (рис. 1B).
- Отмерьте расстояние 2 см от первой лигатуры и создайте вторую лигатуру в области, свободной от кровоснабжения в мезоколоне (Рисунок 1C).
- С помощью тонких ножниц аккуратно вырежьте рядом с каждой лигацией, чтобы изолировать петлю длиной 2 см.
заметка: Тонкими ножницами аккуратно разрежьте рядом с каждой лигацией, чтобы изолировать 4-сантиметровую петлю подвздошной кишки, сохраняя неповрежденное кровоснабжение и брыжеечную мембрану., важно отрезать оба конца, чтобы изолировать pcLoop, который аккуратно очищается от содержимого просвета. Осторожно разрежьте ткани толстой кишки и мезоколона, чтобы предотвратить попадание мелких сосудов в просвет кишечника. При необходимости используйте термическое прижигание, чтобы ограничить кровотечение в месте разреза.
- Аккуратно промойте pcLoop теплым HBSS, чтобы удалить фекалии, с помощью гибкой желтой питательной трубки, прикрепленной к шприцу объемом 10 мл (Подготовьте шприц объемом 10 мл, наполненный теплым HBSS, и прикрепите к желтой питательной трубке. Этот шприц будет использоваться для увлажнения открытых тканей во время операции).
- Обвязкуйте два срезанных конца промытой pcLoop с помощью шелкового шва.
- С помощью шприца объемом 1 мл с иглой 30G медленно введите 200 мкл реагента, такого как ФИТК-декстраны (1 мг/мл в HBSS). Храните неиспользованный раствор ФИТК-декстрана в защищенном от света месте для подготовки стандартной кривой после сбора сыворотки). pcLoop будет раздуваться, вызывая умеренное растяжение слизистой оболочки (Рисунок 1D).
заметка: Введите реагент в просвет pcLoop на противоположной стороне брыжеечной артерии. Обеспечьте согласованность между животными и создайте петлю pcLoop длиной 2 см, чтобы обеспечить равномерное растяжение слизистой оболочки.
- С помощью влажных ватных палочек аккуратно поместите перевязанный pcLoop, подвздошную и слепую кишку обратно в брюшную полость.
- Используйте иглодержатель, анатомические щипцы и нерассасывающиеся шелковые шовные материалы 3.0 с иглой обратной резки для закрытия брюшной стенки.
- Поместите животное в анестезиологическую камеру с регулируемой температурой на период инкубации.
