Доставка молекул индикатора в цистерне Cisterna Magna: метод доставки флуоресцентных молекул индикатора путем прямого канюляции цистерны Cisterna Magna у свиней

Аннотация

Источник: Bèchet, N. B., et al. Прямая имплантация канюли в Cisterna Magna of Pigs. J. vis. Exp. (2021).

В этом видео описывается протокол доставки молекулы индикатора путем прямого канюляции большой цистерны в мозге свиньи. Этот метод помогает визуализировать распределение спинномозговой жидкости в глимфатической системе.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Канюляция и инъекция

ПРИМЕЧАНИЕ: Этот шаг требует как минимум двух человек и выполняется с поднятой головой животного и согнутой шеей.

1. Начните со свиньи под наркозом, предварительно прооперированной хирургически доступной цистерной магна.
2. Убедитесь, что один человек поднимает и сгибает голову и шею животного, в то время как другой пальпирует большую цистерну, отмечая ее анатомическое расположение.
3. Медленно и осторожно введите канюлю 22 G через твердую мозговую оболочку и в большую цистерну под косым углом к продольной оси.
   заметка: Не вставляйте канюлю слишком глубоко, так как это может привести к повреждению мозга. Знание того, как далеко вставлять канюлю, приходит с опытом в понимании того, каково это при прокалывании канюлей твердой мозговой оболочки. По сути, как только твердая мозговая оболочка была проколота, канюля становится достаточно глубокой для успешной инъекции индикатора. Эта глубина составляет примерно 3-5 мм, но будет отличаться в зависимости от размера или возраста животного. Успешная канюляция должна быть немедленно очевидна благодаря визуализации прозрачной, пульсирующей спинномозговой жидкости, восходящей к канюле. Для достижения наилучшего результата рекомендуется предварительно попрактиковаться в нескольких канюляциях у усыпленных животных, чтобы получить представление о пирсинге твердой мозговой оболочки.
4. Отведите иглу от канюли и наденьте колпачок на замок.
5. Сначала нанесите суперклей и ускоритель там, где канюля входит в ткани, после чего следует нанесение стоматологического цемента. Подождите 5 минут, чтобы цемент застыл.
6. Осторожно снимите колпачок с канюли и прикрепите к канюле наружный конец крана IV-капельницы с удлинителем 10 см с помощью трассера.
7. Медленно вводите индикатор вручную или с помощью микроинфузионного насоса со скоростью 100 μл/мин. Снимите кран для 3-ходовой внутривенной линии с удлинителем 10 см и установите на место колпачок. Теперь у основания канюли должен быть виден пульсирующий индикатор.
   заметка: Если вы делаете инъекцию вручную, делайте это до тех пор, пока индикатор не останется видимым в стволе канюли, примерно на 1-2 мм выше того места, где стоматологический цемент покрывает ствол.
8. После инъекции поместите мешочки с песком под шею, чтобы сохранить некоторое сгибание. Затем голова может быть отпущена, и животное остается в положении лежа
.
9. Отпустите самоудерживающиеся втягивающие устройства и расположите мышцы в том виде, в котором они лежали ранее. Сведите кожу вокруг мышц с помощью хирургических зажимов для полотенец.
10. Накройте зажимы для полотенец и разрез марлей, а затем одеялом, чтобы ограничить потерю тепла.
11. Дайте индикатору циркулировать в течение желаемого времени перед усыплением животного путем внутривенной инъекции пентобарбитала (140 мг/кг). Подтвердить эвтаназию по отсутствию сердечных тонов при аускультации с помощью стетоскопа.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Игла 18G	Медик
Шприц 1мл	FischerSci	15849152
Канюля 20G	Медик	NA
Канюля 22G	Медик	NA
Бычий сывороточный альбумин Alexa-Fluor 647 Conjugate	Термофишер	А34785	2 флакона (10 мг)
CaCl2	Зигмалдрич	С1016
Стоматологический цемент	Агнтос	7508
глюкоза	Зигмалдрич	Г8270
Ускоритель CA Insta-Set	БСИ-Инк	БСИ-151
Кран для внутривенных вливаний, 3-х ходовой с удлинителем 10 см	Ббраун	NA
KCl	Зигмалдрич	П9333
Маркер	NA	NA
MgCl2	Зигмалдрич	М8266
Вода MilliQ	NA	NA
NaCL	Зигмалдрич	С7653
2PO4	Зигмалдрич	С8282
НаОГС3	Зигмалдрич	С5761
соляной	Медик	NA
Самоудерживающиеся втягивающие устройства	NA	NA
Суперклей	NA	NA
Хирургические изогнутые ножницы	NA	NA
Хирургические зажимы для полотенец	NA	NA