Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Чтобы кролики могли акклиматизироваться в удерживающих устройствах и чтобы исследователь мог объективно подтвердить стабилизацию кардиореспираторных показателей, оснастите всех кроликов кардиореспираторными и нейрональными датчиками и проводите непрерывный видеомониторинг в течение > 1 часа, 1 - 3 раза на животное.
2. Эксперимент с внутривенным введением лекарств (пентилентетразол, PTZ)
- Чтобы визуализировать краевую ушную вену, побрейте заднюю поверхность уха кролика. Используйте салфетку с содержанием этанола 70% для дезинфекции участка и расширения краевой ушной вены. На это указывает черный пунктирный овал на рисунке 1F.
- На этом этапе пусть один из экспериментаторов накроет лицо кролика рукой, чтобы уменьшить стресс от процедуры для кролика. Второй экспериментатор осторожно канюлирует краевую вену уха с помощью стерильного ангиокатетера 25-G.
- Как только катетер окажется в вене, поместите стерильную инъекционную пробку на конец катетера, чтобы игла могла вводить лекарство внутривенно. Расположение пробки впрыска обозначено синим кругом на рисунке 1G.
- Сделайте шину, обернув марлю размером 4 х 4 дюйма скотчем так, чтобы она образовала форму трубки, и поместив ее внутрь уха кролика. Затем прикрепите шину к уху таким образом, чтобы катетер был закреплен на месте и оставался в вертикальном положении, подобно уху без катетеризации.
- Введите 1 мл 10 единиц USP на мл гепаринизированного физиологического раствора.
заметка: Катетер и сосуд должны быть заметно очищены от воздуха и оставаться чистыми. Если катетер не находится в сосуде, шприц не будет легко проталкиваться, и в подкожной клетчатке будет накапливаться физиологический раствор.
- Давайте кроликам инкрементальные дозы PTZ внутривенно от 1 мг/кг до 10 мг/кг с шагом 1 мг/кг каждые 10 мин. В начале каждой дозы делайте пометку, указывающую, какому животному вводится инъекция><, и концентрацию лекарства.
заметка: Это позволяет оценить острые и аддитивные эффекты введения PTZ. В качестве альтернативы, для дальнейшей оценки хронических эффектов низких доз ПТЗ, кролику дают повторные дозы в каждой низкой концентрации дозы, 7 доз по 2 мг/кг, 3 дозы по 5 мг/кг, затем 3 дозы по 10 мг/кг, каждую дозу разделяют на 10 мин.
- После каждой дозы тщательно контролируйте видео-ЭЭГ-ЭКГ-капнографию-оксиметрию на предмет любых нейро-сердечных, электрических и дыхательных аномалий и визуальных признаков эпилептиформной активности. Обратите внимание на эти изменения в режиме реального времени и во время пост-анализа.
заметка: Судорожная активность часто начинается в течение 60 с после введения ПТЗ.
