Мультисистемный мониторинг эпилептических аномалий у кроликов: метод одновременной видеозаписи ЭЭГ, ЭКГ, капнографии и оксиметрии во время индуцированных припадков

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Чтобы кролики могли акклиматизироваться в удерживающих устройствах и чтобы исследователь мог объективно подтвердить стабилизацию кардиореспираторных показателей, оснастите всех кроликов кардиореспираторными и нейрональными датчиками и проводите непрерывный видеомониторинг в течение > 1 часа, 1 - 3 раза на животное.

2. Эксперимент с внутривенным введением лекарств (пентилентетразол, PTZ)

1. Чтобы визуализировать краевую ушную вену, побрейте заднюю поверхность уха кролика. Используйте салфетку с содержанием этанола 70% для дезинфекции участка и расширения краевой ушной вены. На это указывает черный пунктирный овал на рисунке 1F.
2. На этом этапе пусть один из экспериментаторов накроет лицо кролика рукой, чтобы уменьшить стресс от процедуры для кролика. Второй экспериментатор осторожно канюлирует краевую вену уха с помощью стерильного ангиокатетера 25-G.
3. Как только катетер окажется в вене, поместите стерильную инъекционную пробку на конец катетера, чтобы игла могла вводить лекарство внутривенно. Расположение пробки впрыска обозначено синим кругом на рисунке 1G.
4. Сделайте шину, обернув марлю размером 4 х 4 дюйма скотчем так, чтобы она образовала форму трубки, и поместив ее внутрь уха кролика. Затем прикрепите шину к уху таким образом, чтобы катетер был закреплен на месте и оставался в вертикальном положении, подобно уху без катетеризации.
5. Введите 1 мл 10 единиц USP на мл гепаринизированного физиологического раствора.
   заметка: Катетер и сосуд должны быть заметно очищены от воздуха и оставаться чистыми. Если катетер не находится в сосуде, шприц не будет легко проталкиваться, и в подкожной клетчатке будет накапливаться физиологический раствор.
6. Давайте кроликам инкрементальные дозы PTZ внутривенно от 1 мг/кг до 10 мг/кг с шагом 1 мг/кг каждые 10 мин. В начале каждой дозы делайте пометку, указывающую, какому животному вводится инъекция><, и концентрацию лекарства. заметка: Это позволяет оценить острые и аддитивные эффекты введения PTZ. В качестве альтернативы, для дальнейшей оценки хронических эффектов низких доз ПТЗ, кролику дают повторные дозы в каждой низкой концентрации дозы, 7 доз по 2 мг/кг, 3 дозы по 5 мг/кг, затем 3 дозы по 10 мг/кг, каждую дозу разделяют на 10 мин.
7. После каждой дозы тщательно контролируйте видео-ЭЭГ-ЭКГ-капнографию-оксиметрию на предмет любых нейро-сердечных, электрических и дыхательных аномалий и визуальных признаков эпилептиформной активности. Обратите внимание на эти изменения в режиме реального времени и во время пост-анализа.
   заметка: Судорожная активность часто начинается в течение 60 с после введения ПТЗ.

Рисунок 1: Кролик подключен к оборудованию.(A) Расположение электродов ЭКГ, левая рука обозначена желтой точкой. Правая рука обозначена белой точкой. Левая нога обозначена красной точкой. Земля спереди от правой ноги обозначена зеленой точкой. (Б) Кролик в удерживающем устройстве с прикрепленными электродами ЭКГ и ЭЭГ. (C) Молодой кролик в удерживающем устройстве с соответствующими модификациями для размещения более мелкого кролика, включая усилитель под кроликом, пенопласт для шеи и разрезанную трубу из ПВХ. (D) Кролик в удерживающем устройстве с расположением электродов ЭЭГ. Правая лобная часть обозначена оранжевой точкой. Левый фронтальный обозначен красной точкой. Правая затылочная область обозначена желтой точкой. Левая затылочная область обозначена синей точкой. Ссылка обозначена черной точкой. (E) Кролик в удерживающем устройстве с фотостимулятором и зеркальной будкой. Источник света обозначается белой точкой. (F) Краевая ушная вена после того, как ухо кролика было выбрито и протерто спиртом. (G) Кролик с ангиокатетером, надежно заклеенным в левую краевую вену уха. Место установки пробки для инъекций обозначено синей точкой. (H) Кролик с лицевой маской, прикрепленной к трубке капнографии с помощью тройника, содержащего односторонний клапан. (I) Схема лицевой маски и тройника, соединенных с трубкой капнографии. Во время вдоха комнатный воздух может поступать в тройник через односторонний клапан (зеленая стрелка). По истечении срока действия CO2 покидает тройник, попадая в трубку капнографии (желтая стрелка). Из-за небольшого количества мертвого пространства в тройнике удерживается очень малоCO2 и, как правило, составляет менее 5 мм рт.ст.