Изоляция корнеосклеральной пуговицы: хирургическая процедура получения корнеосклеральной пуговицы из глаза свиньи

Аннотация

Источник: Okurowska, K., et al. Создание модели роговицы свиньи ex vivo для изучения медикаментозных методов лечения бактериального кератита. J. Vis. Exp. (2020).

В этом видео мы показываем процедуру хирургической изоляции корнеосклеральной кнопки для создания модели роговицы свиньи ex vivo. Модель полезна для гистологических, патологических и фармакологических исследований благодаря своему сходству с человеческим глазом.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Стерилизация

1. КРИТИЧЕСКИЙ ЭТАП: Продезинфицируйте все щипцы и ножницы, замочив на 1 час в 5% (v/v) растворе Distel в дистиллированной воде, очистите щеткой, промойте водопроводной водой и стерилизуйте в духовке при 185 °C в течение минимум 2 часов.
2. Всю остальную стеклянную посуду и реактивы стерилизовать путем автоклавирования при 121 °C в течение 15 минут или приготовьте реагенты в соответствии с инструкциями производителя. Выполните следующие процедуры в микробиологическом шкафу безопасности класса II.

2. Сбор образцов

1. Коллекция свиных глаз
   1. Крупные белые свиноматки ландрас, использовался скрещивание с гемпширским хряком. Животные были оглушены электрическим током, а глаза были энуклеированы через 2 часа на скотобойне.
   2. КРИТИЧЕСКИЙ ЭТАП: После энуклеации перенесите глаза в лабораторию в стерильный фосфатно-солевой буферный раствор (PBS), чтобы предотвратить их высыхание, и обработайте их сразу по прибытии.

3. Подготовка корнеосклеральной кнопки

1. С помощью стерильных щипцов удерживайте ткань, окружающую глазное яблоко, и перенесите ее в чашку Петри. Удалите конъюнктиву и мышечную ткань вокруг глазного яблока на чашке Петри с помощью лезвия скальпеля No 15 и щипцов.
2. Аккуратно приподнимите глазное яблоко, удерживая зрительный нерв щипцами, и переложите в банку объемом 0,5 л, наполненную стерильным PBS.
3. Как только все глаза очистятся от окружающих тканей, переместите их с помощью стерильных щипцов в другую банку объемом 0,5 л, наполненную 3% (v/v) повидон-йодом в PBS, и оставьте на 1 минуту.
4. Переложите глазные яблоки в другую банку объемом 0,5 л со стерильным PBS.
5. С помощью щипцов удерживайте глаз неподвижно на чашке Петри и сделайте надрез возле роговицы лезвием скальпеля No 10А.
6. КРИТИЧЕСКИЙ ШАГ: Возьмитесь за край разреза и с помощью ножниц иссеките роговицу, оставив около 3 мм склеры вокруг роговицы. Следите за тем, чтобы острый конец ножниц не прокалывал радужную оболочку или ткань хориоидеи и находился в надхориовидном пространстве.
7. Удерживайте корнеосклеральную кнопку щипцами и используйте еще одну пару щипцов с заостренным концом, чтобы аккуратно отделить увеальную ткань.
8. Поднимите корнеосклеральную кнопку над оставшимся шаром и кратковременно промойте ее в 1,5% (v/v) растворе повидон-йода в PBS в 12-луночной пластине.
9. Поместите корнеосклеральную кнопку в другую 12-луночную пластину, заполненную стерильным PBS.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Пластина Cellstar на 12 лунок	Greiner Bio-One	665180 (Английский
Дистель	Научный центр Фишера	12899357
щипцы	Научный центр Фишера	15307805
ПБС	Технология SLS	П4417
чашка Петри	Научный центр Фишера	12664785
Повидон-йод	Аптека Weldricks	2122828
Лезвие скальпеля No15	Научный центр Фишера	О305
Скальпель Swann Morton	Научный центр Фишера	11849002

)