Экстракция бронхиолярной ткани свиньи: процедура рассечения участков бронхиоларной ткани из легких свиньи

Аннотация

Источник: Harrington, N. E. et al. Тестирование эффективности антибиотиков на модели ex vivo биопленок Pseudomonas aeruginosa и Staphylococcus aureus в легких с муковисцидозом. J. Vis. Exp. (2021)

В этом видео мы описываем хирургическую процедуру по извлечению бронхиолярных тканей из собранного легкого свиньи. Бронхиолярная ткань ex vivo может быть использована для разработки моделей инфекций для изучения хронических инфекций легких.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Диссекция ткани легкого свиньи ex vivo (EVPL)

1. Получите легкие из указанного источника как можно скорее после убоя, обеспечив их хранение в холоде, транспортировав в лабораторию в бытовом холодильном боксе.
   заметка: Легкие ближе ко дню убоя имеют меньше синяков от хранения, но ткани, хранящиеся в холодильнике до 4 дней после убоя, также могут быть использованы. Поскольку холодильный бокс необходимо отнести в мясную лавку или на скотобойню, его необходимо обеззараживать в соответствии с местными лабораторными рекомендациями после каждого использования и хранить за пределами микробиологической лаборатории, когда он не используется, чтобы снизить риск загрязнения и нарушения условий локализации.
2. Работая на стерилизованной поверхности и под огнем, поместите легкие на чистую пластиковую разделочную доску, покрытую автоклавной алюминиевой фольгой. Проверьте, чтобы бронхиолы остались неповрежденными. Если на скотобойне или во время транспортировки произошли какие-либо повреждения, легкие не пригодны для использования.
3. Нагрейте мастихин под пламенем и очень кратковременно прикоснитесь ножом к области легкого, окружающей бронхиолу для стерилизации поверхности ткани.
4. Отрежьте поверхностные ткани, окружающие бронхиолу, с помощью стерильного бритвенного лезвия. Делайте надрезы параллельно бронхиоле, чтобы предотвратить их повреждение.
5. После того, как бронхиола будет обнажена, сделайте поперечный разрез через бронхиолу в самой высокой видимой точке, чтобы освободить бронхиолу.
6. С помощью стерильных щипцов слегка возьмитесь за свободный конец бронхиолы и отрежьте остатки ненужной ткани с помощью стерильного бритвенного лезвия. Сделайте окончательный поперечный разрез поперек бронхиолы, прежде чем станет видно какое-либо разветвление, чтобы удалить бронхиолу из легких.
7. Поместите бронхиолу в первую стирку DMEM/RPMI 1640. Оставьте бронхиолу в промывке и повторите шаги 1.2-1.5, чтобы собрать дополнительные участки бронхиолы из того же легкого, как это необходимо, чтобы получить достаточное количество срезов ткани.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
70% этанол или аналогичный для оборудования для поверхностной стерилизации и препарирования Flamin GOF
Алюминиевая фольга - предварительно стерилизованная автоклавированием - для покрытия разделочной доски, на которой вы будете препарировать легкие
Горелка Бунзена
Разделочная доска - мы рекомендуем пластиковую доску, чтобы обеспечить легкую дезинфекцию спиртом.
Холодильник для транспортировки легких в лабораторию
Ножницы для вскрытия разных размеров
Модифицированная среда Eagle от Dulbecco (DMEM)
Армированные пробирки Fisherbrand 2 мл	Термо Фишер	15545809
Большой мастихоножка
Навесные бритвенные лезвия
Пластиковая разделочная доска и алюминиевая фольга для создания стерильной и очищаемой поверхности для вскрытия
Мемориальный институт Розуэлл Парк (RPMI) 1640 средний
Выбор щипцов (рекомендуются тупые кончики)
Подходящие контейнеры для утилизации загрязненных острых предметов и тканей легких свиньи в соответствии с политикой охраны здоровья и безопасности вашего учреждения.