Выполнение инъекции в орбитальную долю верхней слезной железы: техника индуцирования болезни сухого глаза на модели кролика

Аннотация

Источник: Хонканен, Р. А. и др., Кроличья модель водянистой недостаточной болезни сухого глаза, вызванной инъекцией конканавалина А в слезные железы: применение в исследованиях эффективности лекарств. J. Vis. Exp. (2020).

Это видео описывает процедуру вызова болезни сухого глаза у модели кролика путем инъекции Конканавалина А в орбитальную долю верхней слезной железы. Разработанная модель полезна для изучения эффективности различных препаратов для лечения болезни сухого глаза.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Подготовка животных

ПРИМЕЧАНИЕ: Части системы орбитальных слезных желез инъецируются.

1. Успокоите кроликов ацепромазином в дозе 0,2 мг/кг подкожно.
2. Состробите шерсть в области периорбити и кожи головы и полностью удалите остатки шерсти с помощью Nair. Оставьте кожу полностью гладкой для лучшей визуализации анатомических признаков и введите конканавалин А под контролем УЗИ (Рисунок 1).
3. Вызывайте умеренный седативный эффект, как описано выше.

2. Инъекция верхней глазной железы (OSLG)

ПРИМЕЧАНИЕ: OSLG следует в быстрой последовательности.

1. Приложите медиальное давление к глазному яблоку, в результате чего OSLG выступает из заднего отверстия. Приложите медиальное давление к глазному яблоку (рис. 2, красная стрелка) с выпуклостью OSLG от заднего отверстия. Выпуклость служит грубой локализацией для нахождения заднего отверстия.
2. Используйте изогнутые щипцы с закрытыми кончиками, чтобы углубить область до тех пор, пока не прощупается костное отверстие в черепе. Он будет щелевидным с передним/задним направлением под выпуклостью.
3. Слегка надавите щипцами, чтобы оставить углубление на коже, которое послужит ориентиром для установки иглы (рисунок 3A).
4. Введите иглу (туберкулиновый шприц с иглой 27-го калибра, 5/8 дюйма) перпендикулярно коже над отметкой вдавливания (рис. 3B) ~ 1/4 дюйма в углубление, затем перенаправьте иглу сзади и наружу к боковому кантусу, стремясь к средней точке между местом инъекции и костным орбитальным ободом.
   заметка: Если игла не нацелена точно на него, череп блокирует его продвижение.
5. Как только ступица иглы будет достигнута, медленно введите 1000 мкг Con A в объеме 0,2 мл (рис. 3C).
6. Завершите инъекцию PSLG и OSLG в течение 2-3 минут
7. Извлеките животное из седации изофлураном (если еще не сделано). Инъекция в нижнюю слезную железу (ИЛГ) обычно может быть завершена без дальнейшей седации.

Результаты

Рисунок 1: Подготовка кролика к инъекциям конканавалина А.(A) Небольшие ножницы используются для удаления шерсти, что облегчает визуализацию ориентиров для определения верхней орбитальной слезной железы. (B) Наир используется для удаления волос, которые остаются после стрижки.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Макрообъектив 100 мм	Canon EF 100mm f/2.8L IS USM	3554В002
Иглы 26 калибра (5/8)	Бектон Дикинсон и компания, < /> Франклин Лейкс, Нью-Джерси	305115	Иглы для введения ConA в слезные железы
Иглы 27 калибра (5/8)	Бектон Дикинсон и компания, < /> Франклин Лейкс, Нью-Джерси	305921	Иглы для введения ConA в слезные железы
Ацепроинж (ацепромазин)	Генри Шейн Здоровье животных, < /> Дублин, Огайо	NDC11695-0079-8	0,1 мл/кг подкожно для инъекции<бр/> для седации кроликов
Испаритель для анестезии	VetEquip, Плезантон, Калифорния	Предмет #911103
Щипцы епископа Хармона	Бауш и Ломб (Шторц), Бриджуотер, Нью-Джерси	Е1500-С	Тканевые щипцы
кронциркуль	Бауш и Ломб (Шторц), Бриджуотер, Нью-Джерси	Е-2404	Штангенциркуль используется для измерения длины <бр/> игла во время инъекции ConA
Конканавалин А	Sigma, Сент-Луис, Миссури	С2010	Внесите 5 мг/мл в PBS для инъекций в слезные железы кролика
Кролик, Новозеландский белый или Голландский пояс (как описано в тексте)	Лаборатория Чарльза Ривера, Уолтем, Массачусетс	2-3 кг	Подопытные животные
Хирургические лупы +1.50	Дизайн для Vision, Богемия, Нью-Йорк	Специализированный товар	Обеспечивают великолепие окуляр<бр /> поверхность при наблюдении за разрывом вверх и выполнение Concanavalin A Инъекции.