Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Имплантация опухоли печени с помощью лапаротомии
- Подготовьте кролика-реципиента к лапаротомии. Обезболите кролика-реципиента с использованием 45 мг/кг кетамина и 5 мг/кг ксилазина для индукции с последующей интубацией и поддержанием 1%–3% изофлурана по мере необходимости. Когда кролик находится под наркозом, побрейте место операции с помощью машинки для стрижки волос. Очистите область разреза с помощью тройного промывания с бетадиновым скрабом, 70% раствором этанола и раствором бетадина, а затем наложите стерильную хирургическую
простыню.
- Используя лезвие #15, начните лапаротомию, сделав небольшой вертикальный разрез по средней линии вниз через кожу кролика, начиная с мечевидного отростка. Он должен быть легко пальпирован и, как правило, имеет размер примерно с американский пенни. Смотрите Рисунок 1.
- Отразите кожу и определите белую линию. Это должна быть отражающая белая полоса ткани, идущая вниз по средней линии. Используйте тупое рассечение, чтобы пройти по белой линии и обнажить брюшину. Смотрите Рисунок 2.
заметка: Брюшину легко идентифицировать, так как она будет непосредственно залегать над кишечником, который можно увидеть, как он движется при дыхании.
осторожность: Брюшина имеет тенденцию прилегать к нижележащему кишечнику из-за поверхностного натяжения. Использование тупой травмы для рассечения белой линии помогает снизить риск перфорации подлежащей кишки.
- Как только брюшина обнажится, осторожно рассекайте ее через нее, чтобы войти в брюшную полость. Теперь можно идентифицировать печень. Чтобы лучше ориентироваться в брюшном пространстве, разрез по средней линии следует расширить на 1\u20122 см снизу через кожу, мышцы и брюшину.
заметка: Расширение разреза по средней линии можно легко и безопасно сделать, осторожно вставив изогнутый кровоостанавливатель в пространство брюшины изогнутым кончиком, обращенным поверхностно к брюшине. Затем слегка приоткройте гемостат и с помощью лезвия потрепайте ткань между двумя рукавами гемостата.
- Определить левую долю печени с целью выбора места для имплантации опухоли. Левая доля является нижнелатеральной по отношению к медиальной доле, которая находится по средней линии.
- Прежде чем пытаться вытащить печень из брюшинного пространства, положите сухой кусок марли на нижнюю часть разреза.
заметка: Марля обеспечит адгезивную поверхность для укладки печени, чтобы предотвратить ее втягивание обратно в брюшную полость.
- С помощью либо атравматичных щипцов, либо кусочка влажной марли над пальцами осторожно вытяните левую долю печени из брюшной полости через разрез и положите ее на сухую марлю, положенную ранее. Смотрите рисунок 3.
осторожность: Капсула печени чувствительна и может легко разорваться. Крайне важно быть осторожным при обращении с этим органом, чтобы предотвратить капсулярное кровотечение, ушиб печени и/или возможное образование гемоперитонеума.
заметка: Как правило, печень заявляет о себе визуально при входе в брюшинное пространство; Однако, если желудок кролика растянут, печень может быть вытолкнута краниально из поля зрения. В этом случае аккуратно приподнимите брюшную стенку с помощью тупого зонда. В этом сценарии печень имеет тенденцию прилипать к вентральной части диафрагмы из-за поверхностного натяжения, поэтому осторожно отделите печень с помощью тупого зонда, и она должна отсоединиться. Затем с помощью атравматических щипцов вытащите печень.
- На этом этапе подготовьте опухолевую ткань к имплантации и наложите на печень кусок влажной марли, чтобы защитить ее.
- Выберите 1\u20122 мм3 кусочка предварительно обработанной опухолевой ткани для имплантации в печень. Смотрите рисунок 4.
- С помощью лезвия #11 проколите ткань печени под углом 45°, образовав карман глубиной 0,5 см, стараясь не проникнуть в дорсальную часть печеночной капсулы. Оставьте лезвие на месте после прокола. Смотрите Рисунок 5.
- Осторожно поднимите лезвие в вентральном направлении, чтобы создать небольшой карман в печеночном русле. Возьмите кусочек опухоли с помощью щипцов, поместите кусочек опухоли в этот карман, а затем извлеките лезвие.
заметка: Лезвие может быть удалено перед введением части опухоли, однако печень будет кровоточить, и это может скрыть место прокола, что затруднит его идентификацию.
осторожность: Обязательно следует свести к минимуму контакт опухоли с любыми другими структурами, чтобы предотвратить непреднамеренное зарастание опухоли. Этого также можно избежать, отложив в сторону любые инструменты, используемые для последующей имплантации.
- На этом этапе поместите внутрь опухолевого кармана кусочек гемостатического средства, такого как гелевая пена, чтобы способствовать гемостазу и предотвратить выброс опухолевого кусочка.
- Верните печень в брюшную полость, как только подтвердится гемостаз.
- Закрыть брюшную стенку швом полидиоксанона 3-0 на конической игле с помощью простого непрерывного шва и закрыть кожу швами 4-0 полиглактина 910 на режущей игле с помощью непрерывного подкожного шва.
осторожность: При закрытии брюшной стенки следите за тем, чтобы не повредить сальник или другие структуры кишечника при наложении шва.
